- ￥1160
- umibio
- UR32061
- 上海
- 2025年12月07日
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- 详细信息
- 询价记录
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12月
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50 Rxns×20 μL
★产品名称：miRNA 加尾法逆转录试剂盒
★产品用途：适用于短片段RNA（主要为 miRNA）的加尾法逆转录反应，反应产物 cDNA 主要用于 PCR、qPCR 等反应。
★目录价格：1160；产品货期：现货；
★产品货号：UR32061；产品规格：50 Rxns×20 μL；
★保存方式：-20℃；运输条件：低温；
产品描述：
本试剂盒采用Poly(A)加尾反应和cDNA合成反应同步进行的方法来进行miRNA第一链cDNA的合成，包含了与此配套的通用型qPCR反向引物（Universal 3’qPCR Primer），仅需自行设计一条目的miRNA的特异性正向引物，就能够用于miRNA的定量检测。具体过程是：先通过Poly(A) Polymerase在miRNA的3’末端加Poly(A)尾，再使用Oligo(dT)-Universal Tag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成miRNA的cDNA第一链。
本试剂盒为包含去除基因组DNA的高效DNase的快速逆转录试剂盒，主要含有4管试剂：gDNA Remover、miRNA RT Enzyme Mix、4× miRNA RT Buffer、Universal 3’qPCR Primer、U6 Primer。其中，gDNA Remover中主要包含浓缩的DNase和buffer，仅需室温（19~27℃）反应5 min，就能降解95%以上的基因组DNA，极大地降低了残留基因组对结果的干扰。
miRNA RT Enzyme Mix中主要包含了Poly(A) Polymerase、逆转录酶、RNase Inhibitor。其中的Poly(A) Polymerase不但具有高效的加Poly(A)尾效率，还特异性识别成熟的单链miRNA，从而避免了具有双链结构的miRNA前体的逆转录反应；逆转录酶采用新型M-MLV突变体逆转录酶，具有很强的抗干扰能力及扩增能力，扩增效率优异。
4×miRNA RT Buffer包含了miRNA加Poly(A)尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，包括Oligo(dT)- universal tag通用逆转录引物、buffer和dNTPs，并经过精心优化，可保证miRNA 3’末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。
产品组成：
|
组分名称 |
规格 |
|
gDNA Remover |
50 μL |
|
miRNA RT Enzyme Mix |
100 μL |
|
4× miRNA RT Buffer |
250 μL |
|
Universal 3’qPCR Primer (10 μM) |
750 μL |
|
U6 Primer (10 μM) |
150 μL |
|
Nuclease-free ddH2O |
1 mL |
产品优势：
专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；
性价比高，为您的研究开展节省成本；
数百篇参考文献让您放心使用无忧购；
质控数据：
产品使用：
1、 使用前将各组分从冰箱中取出，冰上融化，上下颠倒5~10次使之充分混匀，然后使用离心机短暂离心将管壁上附着的液体甩下来，置于冰上待用。
去除基因组DNA反应：
2、 用gDNA Remover处理RNA：取100 ng~1 μg总RNA或10 ng~20 ng miRNA（一般建议用0.5 μg的总RNA），加入1 μL的gDNA Remover，加ddH2O补足10 μL，用移液器轻柔吹打10次左右使之充分混匀，使用离心机短暂离心至管底，然后室温（19~27℃）反应5 min，反应结束后置于冰上待用。
逆转录反应：
3、 按照如下体系配制加尾和逆转录同时反应体系：
4、 按照上表加好试剂后，必须用移液器轻柔吹打10次充分混匀（注：混匀时建议将移液器刻度调到18 μL左右），然后使用离心机短暂离心至管底。
5、 逆转录反应程序：37℃反应15 min，42℃反应10 min，95℃反应3 min，即可得到包含所有miRNA的cDNA第一链。
6、 逆转录反应得到的cDNA可直接作为模板进行qPCR反应，或者稀释5~10倍后再使用（具体的稀释倍数根据基因表达丰度来确定）。在20 μL的qPCR反应体系中：如果模板cDNA稀释10倍，建议使用5 μL的cDNA（2~8 μL）。如不立即进行qPCR实验，建议将cDNA冻存于-80℃冰箱中。
miRNA的qPCR上游引物的设计：
1、 在miRNA数据库网站上搜索得到目的miRNA成熟体序列。
2、 复制目的miRNA序列，将其中的U改成T，然后去掉3’端的最后6个碱基。
3、 在5’端加上3~6个碱基（目的是提高引物的Tm值，加入的序列以GC为主，例如CGGGC，GCGGGC，A/TGCCCG等），使上下游引物的Tm值相近，得到最终的正向引物序列。
常见的注意事项、操作要点及优化方法：
1、 实验开始前首先验证qPCR引物是否适用，主要观察扩增曲线与熔解曲线；
2、 引物验证后应分装冻存，防止污染或降解；
3、 miRNA的质量及cDNA的质量对qPCR的结果具有很大的影响，应尽量保证miRNA不降解。RNA提取后应尽快进行逆转录反应，避免反复冻融，或者多次逆转录反应。如果预计使用量较大，则可以一次多逆转录几管cDNA。如果条件允许，cDNA建议保存在-80℃冰箱。
经典案例：
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