线粒体组学的研究方法 1. 结构研究 a) 线粒体形态学观察 i. 免疫荧光技术 ii. 电镜(包括普通电镜和免疫电镜) b) 线粒体DNA基因组稳态筛查
i. 线粒体DNA的复制和拷贝数变化,qPCR法 ii. 线粒体DNA的突变检测(点突变、框移突变等) iii. 线粒体SNP突变位点筛查 iv. 线粒体RNA(包括tRNA)功能和含量鉴定,qPCR和WB法 c) 线粒体特异性蛋白转位、修饰 i. 线粒体凋亡蛋白(细胞色素c释放)转位检测,WB和免疫荧光法 ii. 线粒体内外膜蛋白.磷酸化、泛素化、乙酰化、寡聚化检测,WB或免疫荧光法 2. 功能研究 a) 线粒体呼吸功能 i. 线粒体氧化磷酸化分析,线粒体呼吸测定仪检测 ii. 线粒体有氧呼吸蛋白变化,WB或ELISA法 iii. 线粒体代谢底物和代谢生成物检测,ELISA法 b) 线粒体ROS(氧化应激和抗氧化能力) i. 线粒体ROS生物含量检测,流式或免疫荧光法 ii. 线粒体ROS介导的磷脂或蛋白氧化:液相质谱仪或WB法 iii. 线粒体ROS类型检测:荧光探针、ELISA法 iv. 线粒体抗氧化蛋白含量变化:WB、ELISA c) 线粒体钙稳态 i. 线粒体钙瞬时变化检测:钙火花(钙波)检测 ii. 线粒体基线钙变化检测:流式或免疫荧光 iii. 线粒体钙峰值分析:3D钙火花测定
d) 线粒体凋亡检测 i. 线粒体凋亡信号启动检测:ELISA法或免疫荧光 ii. 线粒体凋亡特异性过程检测:cyt-c渗漏免疫荧光和WB法 iii. 线粒体凋亡蛋白谱变化:WB或qPCR法 e) 线粒体膜电位检测 i. 线粒体膜电位单荧光检测(功能线粒体标记检测):流式或免疫荧光 ii. 线粒体膜电位双荧光检测(功能和损伤线粒体双标记检测):流式或免疫荧光