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piggyBac载体/哺乳动物
企业认证
云舟生物科技(广州)股份有限公司
定制载体构建服务
PiggyBac载体系统可以非常高效地把外源DNA插入哺乳动物细胞的基因组,该系统技术简单,可利用质粒转染(非病毒转导)把您所感兴趣的基因长期稳定地整合到靶细胞基因组。
该系统来源于piggyBac转座子,最开始在粉纹夜蛾(Trichoplusia ni) 中发现并分离而来。基于序列同源性分析,piggyBac转座子是许多常见物种共有的一类转座子。
PiggyBac系统包含两个载体,一个载体被称为辅助质粒,负责编码转座酶;另一个载体被称为转座子质粒,包含两个末端重复序列(TRs)以及两者之间的被转座区域,需要被转座到宿主基因组中的目的基因就克隆在这个区域。
当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时,辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个TR元件,然后将被转座区和两个TR元件插入到宿主基因组中。转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点,并在转座子两侧出现TTAA重复序列。
PiggyBac属于II类转座子,通过“剪切—粘贴”的机制移动,从一个地方转座到另一个地方,而不留下序列本身(恰好相反,I类转座子是通过“复制—粘贴”的方式移动)。由于辅助质粒是通过瞬时转染进入宿主细胞的,故会逐渐丢失。随着辅助质粒的丢失,转座子在宿主基因组中变成了永久整合。当这些宿主细胞再次被辅助质粒转染,整合的转座子会再次通过“剪切—粘贴”的机制移动。亮点
我们的piggyBac转座子载体与辅助质粒是经过优化的,可在大肠杆菌中高拷贝复制。该载体系统对多种类型的靶细胞均具有高效的转导效率,实现外源基因的高水平表达。
外源基因的永久整合:常规质粒转染只能实现外源基因的瞬时表达,这种外源基因会随着宿主细胞的分裂而不断丢失,在快速分裂的细胞中显得尤为显著。相反,将piggyBac转座子载体和辅助质粒一起转染到哺乳动物细胞中,由于转座子在转座酶的作用下,目的基因能稳定地整合到宿主细胞的染色体中,从而实现转座子载体上携带的目的基因在宿主细胞中永久表达。
技术简单:通过常规转染即可把质粒转入细胞,相比起病毒载体需要进行病毒包装,过程更简单。
载体容量大:我们的转座子载体总容量可达30 kb,其中质粒骨架只占3 kb,有足够大的容量可以放置客户所感兴趣的序列。
转染细胞类型受限:PiggyBac载体进入细胞依赖于转染。不同类型的细胞,其转染效率差异非常大。非分裂细胞通常比分裂细胞更难转染,原代细胞比永生化细胞更难转染,一些重要的细胞类型转染难度更大,如神经元和胰岛β细胞。另外,质粒转染主要局限于体外应用,很少应用于体内实验(但可以应用于转基因动物模型制备)。以上因素在一定程度上制约了piggyBac系统的应用。更多详情请点击Vectorbuilder载体设计-选择载体系统-云舟生物 (vectorbuilder.cn)
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