牛轮状病毒通用RT-PCR试剂盒

牛轮状病毒通用RT-PCR试剂盒
英文名称：Bovine Rotavirus(BRAV) RT-PCR Kit 
牛轮状病毒病是由轮状病毒引起的多种幼龄动物和婴幼儿的急性胃肠道传染 病，以精神委顿、厌食、呕吐、腹泻、脱水为主要特征。本病主要发生在犊牛， 在人和各种动物间有一定交互感染作用，只要病毒在人或一种动物中持续存在， 就有可能造成本病在自然界中长期传播。本产品根据PCR原理开发，可用于科研领域快速检测牛轮状病毒通用。

产品特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据牛轮状病毒通用的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

牛轮状病毒通用RT-PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄 盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	牛轮状病毒通用RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	牛轮状病毒通用RT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
说明书	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的 DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂：样品 RNA

使用方法：

一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 牛轮状病毒通用PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对 照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
牛轮状病毒通用RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5 μL
超纯水		12.5 μL
牛轮状病毒通用RT-PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
逆转录	42℃	30 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照必须有 135bp 的条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有 预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。


牛轮状病毒通用RT-PCR试剂盒相关产品：

产品名称	方法	产品规格	价格
牛轮状病毒通用RT-LAMP试剂盒	LAMP	50次	2990
牛轮状病毒通用RT-PCR试剂盒	PCR	50次	2490
牛轮状病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒	染料法	50次	2990
新疆出血热病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒	探针法	50次	3490