马媾疫锥虫PCR试剂盒

马媾疫锥虫PCR试剂盒
英文名称：Trypanosoma equiperdum
马媾疫是马媾疫锥虫寄生于马属动物的生殖器官引起的一种寄生虫病。以外 生殖器炎症、水肿、皮肤轮状丘疹和后躯麻痹为特征。0IE 将其列为 B 类动物 疫病。仅马属动物对媾疫锥虫易感，主要在生殖器官黏膜寄生，通过病畜与健 康畜交配感染，幼畜可经乳汁感染，也可通过未经严格消毒的人工授精器械、 用具等传染。媾疫锥虫侵入公马尿道或母马阴道黏膜后，在黏膜上进行繁殖， 引起局部炎症。病马屡配不孕，或妊娠后易流产。本试剂盒是根据 PCR 原理 开发。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。 
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增马媾疫锥虫。 
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。 
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

马媾疫锥虫PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	马媾疫锥虫 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	马媾疫锥虫PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 马媾疫锥虫 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
马媾疫锥虫 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（马媾疫锥虫 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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