层粘连蛋白包被25cm²培养瓶，50ml，透气盖，灭菌

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7  培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1  转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2  取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞

细胞培养注意事项（入门级）

达到70－80%就可以传代。早点传代也可以。如果是贴壁生长的细胞：1） 培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液；2） 无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）；3） 加入适量胰酶消化适当时间（一般胰酶为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）；4） 用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）；5） 加入适量体积完全培养基终止

重组腺病毒构建、扩增及纯化

液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7、培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP,可观察到绿色荧光）。四、重组病毒鉴定 1、转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2、取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞病变。 3、感染后3-5d，当1/3-1/2细胞漂浮时