狷羚疱疹病毒1型PCR试剂盒

狷羚疱疹病毒1型PCR试剂盒

英文名称：Alcelephine Herpesvirus 1(AlHV-1）
狷羚疱疹病毒 1 型(Alcelephine Herpesvirus 1，AlHV-1) 会引起肉牛恶性卡他 热病，自然感染的情况下，主要是牛容易发生该病，尤其是 1～4 岁的牛比较容易发生， 而老龄牛和幼龄牛相对比较少发病。病牛往往突然出现高热，体温升高达到 41- 42℃， 呈稽留热，且体质迅速虚弱，接着眼、口、鼻黏膜很快出现严重炎症。双眼不停流泪， 眼脸发生肿胀闭合，且有纤维素性脓性分泌物流出，角膜发生混浊，甚至形成溃疡，最 终导致失明。这一疾病对养牛业造成巨大危害，因此狷羚疱疹病毒 1 型的快速准确鉴定 对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的狷羚疱疹病毒1型PCR检测试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。 
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增狷羚疱疹病毒1型。 
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。 
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

狷羚疱疹病毒1型PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	狷羚疱疹病毒1型PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	狷羚疱疹病毒1型PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 鲍疱疹样病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
狷羚疱疹病毒1型PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（狷羚疱疹病毒1型PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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