灭鲑气单胞菌PCR试剂盒

灭鲑气单胞菌PCR试剂盒
英文名称：Aeromonas salmonicida Type2 PCR Kit 
灭鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是气单胞菌属(Aeromonas)细 菌的一个种，是引起鲑鳟鱼类疖疮病及溃疡病的最主要病原菌，给鲑科 (Salmonidae)鱼类养殖带来严重损失。近年来研究表明，该菌宿主范围逐渐扩 大，可感染除了鲑科外的其他水产动物，如刺参、斑点叉尾鲙、乌鳢和大菱鲆 等。对灭鲑气单胞菌的检测主要依赖于传统的微生物分离培养鉴定方法，其操 作过程费时、繁琐，且很难得到准确结果，常常延误病情的诊断，而且对于已 感染该菌但尚未发病的鱼类，通过常规分离鉴定方法很难得到准确结果本产品 是根据 PCR 原理开发的灭鲑气单胞菌检测试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增灭鲑气单胞菌。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

灭鲑气单胞菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	灭鲑气单胞菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	灭鲑气单胞菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 灭鲑气单胞菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
灭鲑气单胞菌 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（灭鲑气单胞菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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