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- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Adenovirus(AV)Probe qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Adenovirus(AV)Probe qPCR Kit
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据腺病毒 A 型保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的腺病 毒 A 型。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 本只能用于科研，足够 50 次 20μL 体系的荧光定量 PCR。
腺病毒 A 型探针法荧光定量PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
2×Probe qPCR MagicMix | 500 μL（本色盖） |
| 试剂二 |
荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 |
腺病毒 A 型探针法 qPCR 引物 混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
腺病毒 A 型qPCR 探针 | 50 μL（棕色管） |
| 试剂五 |
腺病毒 A 型探针法 qPCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（黄盖） |
| 试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。 由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， 下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼 容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用 水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后最后加）：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 腺病毒 A 型qPCR 探针 | 1 μL | 1 μL | 各1 μL |
| 腺病毒 A 型探针法 qPCR 引物 混合液 | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| N+2 个待测 DNA 模板 | 7 μL | ||
| 超纯水 | 7 μL | ||
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） | 各7 μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） | 95℃ | 15sec |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧 光信号） |
四、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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方法 |
产品规格 |
价格 |
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