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        高效能、低成本、重复性高---Ⅴ型病毒检测试剂盒跨入新时期

        互联网

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        经过长达一年的研发,具有生博特色的用于“Ⅴ型腺病毒滴度检测的试剂盒”上个月成功投入应用,前期的Ⅴ型腺病毒滴度检测效果良好,在行业内同类产品中处于领先水平,市场测评反应颇佳。为响应良好的市场反馈和满足不断增长的市场需求,目前生博公司生产出大批不同实用包装的“Ⅴ型腺病毒滴度检测的试剂盒”满足不同的客户要求,欢迎有兴趣的客户采购和申请免费试用装。

        传统的腺病毒滴度检测方法TCID50

        实验原理

        利用腺病毒可以在HEK293细胞中复制的特性,将经过梯度稀释的腺病毒感染HEK293细胞,10天后感染病毒的细胞由于腺病毒的复制而发生病变,未感染腺病毒的细胞形态保持不变。此过程需要在在光学显微镜下观察。

        实验步骤

        ♦ 在实验前24小时,向96孔板每孔加入100 μl HEK293细胞悬液,约1x103个细胞;

        ♦ 准备10个无菌的Ep管,在第一个Ep管中加入990 μl的完全培养液,其余的9个管子中各加入900 μl的完全培养液;

        ♦ 待测病毒液的稀释:取10 μl腺病毒原液加入990 μl 的Ep管中做1:100稀释(10-2);然后以此为起点,再取100 μl稀释液加入到900 μl 的Ep管中做1:10稀释(10-3),直至稀释到10-14

        ♦ 从孵箱中取出96孔板,在显微镜下确定每孔的细胞均生长良好。吸弃旧培养液,然后依次将10-7至10-14稀释的病毒液加入96孔板中,每一稀释度占用一行,每一行10孔重复,每孔加入90 μl病毒稀释液,而每一行的第11-12孔均加入90 μl不含病毒的完全培养基作为对照;

        ♦ 将96孔板置于置37℃,5%CO2细胞培养箱中继续培养。

        ♦ 10d后观察细胞病变现象,并对CPE孔进行计数,计算每一行的阳性率,计算病毒滴度(Spearman-Karber Method):

        病毒滴度=10 (x+0. 8) (pfu/ml)

        X表示:从10-1到10-12依次稀释度下CPE阳性率孔数的总和,

        单个孔阳性记为0.1

        公式使用条件:

        阴性对照没有CPE和生长抑制现象;加入最小稀释浓度病毒液的孔均有CPE

        举例说明:

        高效能、低成本、重复性高---Ⅴ型病毒检测试剂盒跨入新时期

        从10-1到10-9每个梯度10个孔均为阳性,10-11与10-12分别有4个和2个孔为阳性

        病毒滴度=10(9+0.4+0.2+0.8)

        =1010.4(pfu/ml)

        =2.5×1010(pfu/ml)

        酶联免疫法腺病毒滴度的测定(生博腺病毒滴度检测试剂盒

        上海生博独立开发的腺病毒滴度检测试剂盒AdTiter,可以使您在2.5天内获得准确的腺病毒滴度(单位:IU),操作简单,即使您是初次试验者也能够准确测得病毒滴度。

        实验原理

        腺病毒可以感染并且在HEK293细胞中复制,5型腺病毒表达一种特殊的外壳蛋白Hexon,感染腺病毒的HEK293细胞使用甲醇固定后,再用抗Hexon的一抗孵育,一抗会与腺病毒上的Hexon蛋白结合,此时加入辣根过氧化物酶标记的二抗孵育,待二抗与一抗结合后再加入辣根过氧化物酶的底物DAB进行染色,然后洗脱多余的染色液,被病毒感染的阳性细胞会被染成褐色,计数阳性细胞,利用公式计算病毒滴度。

        实验步骤

        ♦ (1)选取状态良好的HEK293细胞,使用完全培养基重悬细胞,制备成2.5×105个/ml的细胞悬液,24孔板每个孔中种入1ml细胞,37℃、5%CO2培养1小时。

        ♦ (2)准备好10倍梯度稀释的病毒样品,每孔逐滴加入100μl病毒样品。

        ♦ (3) 37℃、5%CO2感染2天。

        ♦  (4)轻轻的去除培养液,沿着24孔板侧壁缓缓加入预冷的甲醇0.5ml,-20℃孵育20min。

        ♦ (5)使用PBS轻轻的冲洗细胞3次,每次5min。

        ♦ (6)使用1%BSA的PBS室温封闭1小时。

        ♦ (7)加入0.25ml的1×anti-Hexon抗体溶液至每个孔中,室温孵育1小时。

        ♦ (8)使用PBS轻轻的冲洗细胞3次,每次5min。

        ♦ (9)加入0.25ml1×辣根过氧化物酶标记的二抗至每孔,室温孵育1小时。

        ♦ (10)使用PBS轻轻的冲洗细胞3次,每次5min。

        ♦ (11)加入0.25ml新配置的1×DAB工作液至每孔,室温孵育10min。

        ♦ (12)弃DAB,使用PBS冲洗2次,每孔加入1 ml PBS。

        ♦ (13)每孔随机选择5个视野,使用光学显微镜10×物镜下计算阳性细胞个数。

        ♦ (14)计算每孔阳性细胞的平均个数和病毒滴度,公式如下:

        测的病毒滴度单位为IU

        高效能、低成本、重复性高---Ⅴ型病毒检测试剂盒跨入新时期

        高效能、低成本、重复性高---Ⅴ型病毒检测试剂盒跨入新时期

        生博腺病毒滴度检测试剂盒:酶联免疫法阳性细胞为褐色容易区分

        免费试用“Ⅴ型腺病毒滴度检测的试剂盒"网站链接:http://www.sbo-bio.com.cn/20101201.asp

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