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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
SHCC
- 运输方式:
干冰/常温
- 年限:
10年
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
1*10^6cell/T25
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种属 |
人 |
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别称 |
143b; 143 B; 143B TK-; 143B.TK-; 143BTK-; 143TK-; HOS-143B; HOS-143b; GM05887; GM05887A |
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组织来源 |
骨 |
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疾病 |
骨肉瘤 |
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传代比例/细胞消化 |
1:2传代,消化2-3分钟 |
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完全培养基配置 |
MEM培养基;10%胎牛血清;0.015mg/ml 5-溴-2-脱氧尿苷;1%双抗 |
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简介 |
胸苷激酶阴性(TK-)。这是一个人骨肉瘤细胞系 |
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形态 |
混合型、上皮和成纤维细胞样 |
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生长特征 |
贴壁生长 |
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倍增时间 |
每周 2 至 3 次 |
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STR |
Amelogenin: X CSF1PO: 12 D13S317: 12 D16S539: 10,13 D5S818: 13 D7S820: 11,12 TH01: 6 TPOX: 11 vWA: 18 |
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培养条件 |
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
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冻存条件 |
冻存液:90%FBS,DMSO 10%, 或使用非程序冻存液:官网货号SH-H040 |
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保藏机构 |
ATCC; CRL-8303 |
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产品使用 |
仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
1)复苏细胞:将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
- 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
a、收集细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。












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文献和实验据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
性,因此较适合于作为遗传学DNA分子标记,目前STR分析已广泛应用于遗传制图、性状连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。 1985年,Mullis发明了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR), 使DNA的体外复制变成了现实。1988年,Saiki 等将耐热DNA聚合酶引入PCR,提高了扩增反应的特异性和效率,简化了操作程序,并实现了DNA扩增的自动化,迅速的推动了PCR技术的应用和普及。PCR能够在体外快速、特异
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增,电泳确认 PCR 产物大小,对大小正确的产物进行测序,如测序结果与理论序列一致,则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通:我们在实践中发现,即使 Donor 序列完全正确,部分鼠会存在突变或片段缺失的情况,我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致,所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的,建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
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