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- 赛泓瑞生物
- 进口
- SHC1134H
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
SHCC
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
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种属 |
人 |
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别称 |
Hs 746T; HS 746T; Hs-746T; HS-746T; Hs746T; HS746T; Hs746-T; 746T |
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组织来源 |
胃 |
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疾病 |
胃腺癌 |
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传代比例/细胞消化 |
1:2传代，消化2-3分钟 |
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完全培养基配置 |
DMEM培养基；10%胎牛血清；1%双抗 |
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简介 |
HS-746T细胞1973年建系（Naval biosciences laboratory）。该细胞系的细胞大小，形状及核状态均会在培养过程中发生变化。由于细胞的恶性化，染色多为亚三倍体（46%）。 |
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形态 |
上皮细胞样 |
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生长特征 |
贴壁生长 |
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倍增时间 |
每周 2 至 3 次 |
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STR |
Amelogenin: X,Y CSF1PO: 10,12 D13S317: 10 D16S539: 11 D5S818: 11,13 D7S820: 8 THO1: 9 TPOX: 8,10 vWA: 15,17 |
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培养条件 |
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
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冻存条件 |
冻存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序冻存液：官网货号SH-H040 |
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保藏机构 |
ATCC; HTB-135 |
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产品使用 |
仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
1）复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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文献和实验据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增，电泳确认 PCR 产物大小，对大小正确的产物进行测序，如测序结果与理论序列一致，则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通：我们在实践中发现，即使 Donor 序列完全正确，部分鼠会存在突变或片段缺失的情况，我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致，所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的，建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
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