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文献和实验invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔……板的实验体系,因为需要转染的细胞量大,所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧! 1、转染前一天,以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时,细胞要达到90~95%的融合
脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2,3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时
质。此外,该方法可用于稳定和瞬时表达,与其他化学方法不同,它可以实现动物和人体内 DNA 和 RNA 转移。阳离子脂质体介导的转染的主要缺点在于,其转染效率取决于细胞类型和培养状态,需要根据细胞类型和转染试剂优化转染条件。 图 1. 阳离子脂质体介导的输送机制 转染小贴士 2. 阳离子脂质体介导的工作流程 文章来源:赛默飞世尔科技
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