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- 经科
- JKA1451
- 国产
- 2025年12月16日
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上海经科化学科技有限公司
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10ml
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封闭用正常驴血清 使用方法免疫组化：用5-10%正常驴血清封闭（1:10-1:20倍稀释），室温孵育5-10分钟。清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃或室温孵育4℃过夜。
细胞涂片： 用5-10%正常驴血清封闭（1:10-1:20倍稀释），使用 PBS 稀释（ 0.01mol/L pH7.4），少量点滴：漠过细胞涂片即可.
ELISA: 1:100倍稀释 使用 PBS 稀释（ 0.01mol/L pH7.4）37℃一小时
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
最好是按照CST的protocol来做，比如封闭用5%牛奶（而非5%BSA,尤其是对pAKT 而言，效果更好）in TBST 室温一个小时，一抗稀释在5%BSA in TBST 中（而非5%脱脂牛奶）4度过夜，这样我相信背景会降低，提高信噪比。 chuckdouble ylhuang0502 wrote: 最好是按照CST的protocol来做，比如封闭用5%牛奶（而非5%BSA,尤其是对pAKT 而言，效果更好
llh刘丽华 请教高手我最近做western blot，结果总是不理想，目的条带总是很淡，上样量已经是60ug了，封闭用的是5%脱脂奶粉，我还应该怎么改进哦？下面是我的结果，采用的是ECL化学发光，凝胶成像系统拍照，下面一条是我的目的条带。 麻烦各位帮帮忙吧！ Mostino 转膜应充分，并提高第一抗体的使用量！ 成其瑞 用好点的抗体 volano
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