- ￥290
- YLKBIO
- YLK-T0064
- 国产
- 2025年12月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
200
- 英文名：
DNAGREENPCRGrade
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
0.1mL
中文名称：PCR级绿如蓝染料，20×
英文名称：DNAGREENPCRGrade
产品规格：0.1mL
产品货期：1-2天
产品运输：低温运输
产品介绍：qPCR染料
产品及特点：
第二代的非饱和型荧光染料（如 SYBR Green I）在高浓度下会抑制荧光 PCR， 所以反应重复性很不稳定，并且不能用于要求严格的 Tm 分析。本产品跟 SYTO9、LC Green、EvaGreen 一样，是第三代饱和型荧光染料，在饱和浓度下也不抑制荧光PCR 反应，具有下列特点：
1.饱和浓度不抑制PCR 反应，因此得到的荧光信号更强。
2.抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前最常用的SYBR Green I。
3.饱和浓度下染料分子没有机会在 DNA 分子间发生移位，因此荧光强度跟 DNA 变性程度呈线性关系，可以用于精细的 Tm 测定实验，如 High-resolution melting curve analysis 等。
4.跟目前常用的 PCR 仪器 (包括 iCycler、LightCycler、ABI 测序仪) 兼容。激发和发射光谱跟FAM 和 SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I 的光学设置参数。
5.不能渗透进入细胞内，毒性和致突变性远低于SYBR Green I。可以用于 qPCR、高分辨 DNA 溶解曲线分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛细管电泳等研究。
规格及成分：
| 成 份 | 0.1 mL 包装 | 1 mL 包装 |
| PCR级绿如蓝染料，20× | 250 mL | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 | 1 份 |
运输及保存：常温运输、-20℃避光保存，有效期一年。
自备试剂：PCR 试剂、DNA 模板、引物、超纯水。
本产品仅供科研
使用方法：
先将本产品放置在室温融化，然后震荡 10 秒钟，短暂离心后待用。下面以 50 uL 的标准PCR 反应体系为例说明其使用：
1. 在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：
10 X PCR Buffer (No Mg2+) 5 uL MgCl2 50 mM 2.5 uL
dNTP 10 mM 1 uL
本产品(PCR 级绿如蓝染料) 2.5 uL
Taq DNA 聚合酶 1-5 UDNA 模板 适量
PCR 引物 5-50 pmol each
补水到 50 uL
2. 放入荧光 PCR 仪中进行 qPCR，并在退火或延长反应时记录荧光信号。使用的光学参数可以跟FAM 或 SYBR Green I 完全一样。
注意事项：
1.如果使用iCycler，可以不加 FAM；如果使用 ABI 系统，需要在 Well Inspector选项下的非特异参照中选择“无”；使用 LightCycler 时，最好在 PCR 体系中再加入终浓度为 0.5 mg/mL 的BSA 以降低仪器对染料和模板的非特异吸附。
2.如果使用化学修饰过的 Taq DNA 聚合酶，可能需要减低 KCl 的浓度并提高Tris 的浓度。
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文献和实验梯度（两个孔）取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值（三个孔）取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度，按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量，算法为：上样量= 50/蛋白浓度。注：所有得到的 OD 值必须减去背景（标曲中空白孔的 OD 值）后再计算。 样品处理： 蛋白样品：5×SDS 上样缓冲液按照 4：1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用（可保存半年），样品长期保存须置于 -70
0.5mg/ml牛血清白蛋白（5，10，15，和20ul），以0.15mmol/L NaCl 补足至100ul。同时以两管100ul的0.15mol/L NaCl作空白对照管，每管各加入1ml考马斯亮蓝染料溶液，遮挡混匀，室温放置2min，用1cm光经的微量比色杯测A595，取A595吸光值对标准蛋白作图，画出标准曲线，回归系数R必须大于0.99，然后测量待测样本A595，从BSA标准曲线中确定待测样品的浓度，样本浓度过高则在稀释后再测定。 结果如下： 血清白蛋白 （ul） 5 10 15 20
buffer，180W，6mins，0℃超声波破碎，5000rpm，5mins 离心，取上清。加入β-ME(9.5ml加入0.5ml)，溴酚蓝（9.5ml加入0.5ml）煮沸10min，分装后于-20℃保存，用时取出，直接溶解上样。 2 细胞：细胞的处理方法： 离心收集细胞或者直接往细胞培养瓶内加入5×STOP buffer，收集，180W，6mins，0℃超声波破碎，5000rpm，5mins 离心，取上清。加入β-ME(9.5ml加入0.5ml)，溴酚蓝（9.5ml加入0.5ml）煮沸10min
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