组蛋白H3（核内参）单克隆即用型免疫组化试剂盒/Histon

Histone H3 Ready-To-Use IHC Kit
组蛋白 H3（核内参）单克隆即用型免疫组化试剂盒
产品规格: 50T （包含三个对照切片）
产品组分及规
样本类型：FFPE 组织切片
保存条件：见下表。有效期 6 个月。
背景
Histone H3 is one of the DNA-binding proteins found in the chromatin of all eukaryotic cells. H3 along with four
core histone proteins binds to DNA forming the structure of the nucleosome. Histones play a central role in
transcription regulation, DNA repair, DNA replication and chromosomal stability. Post translationally, histones are
modified in a variety of ways to either directly change the chromatin structure or allow for the binding of specific
transcription factors. The N-terminal tail of histone H3 protrudes from the globular nucleosome core and can
undergo several different types of post-translational modification that influence cellular processes. These
modifications include the covalent attachment of methyl or acetyl groups to lysine and arginine amino acids and
the phosphorylation of serine or threonine. 别名
H3 histone family member E pseudogene; H3 histone family, member A; H3/A; H31_HUMAN; H3F3; H3FA;
Hist1h3a; HIST1H3B; HIST1H3C; HIST1H3D; HIST1H3E; HIST1H3F; HIST1H3G; HIST1H3H; HIST1H3I;
HIST1H3J; HIST3H3; histone 1, H3a; Histone cluster 1, H3a; Histone H3 3 pseudogene; Histone H3.1; Histone
H3/a; Histone H3/b; Histone H3/c; Histone H3/d; Histone H3/f; Histone H3/h; Histone H3/i; Histone H3/j; Histone
H3/k; Histone H3/l; H3.1; H3/d; H3C1; H3C10; H3C11; H3C12; H3C2; H3C3; H3C4; H3C7; H3C8; H3FD.
产品组分及规格：

编号	组份	规格	浓度	储存
1	PBS 缓冲液（干粉）	2 L×2	20x	室温
2	抗原修复缓冲液	20ml	100x	2-8℃
3	内源性过氧化物酶阻断剂	3ml	RTU	2-8℃
4	封闭工作液	3ml	RTU	2-8℃
5	一抗	6ml	RTU	2-8℃
6	二抗	6ml	RTU	2-8℃
7	DAB kit（20×）显色液	0.3 ml	RTU	-20℃
8	DAB kit（20×）稀释液	0.3 ml	RTU	-20℃
9	复染试剂	5ml	RTU	室温
10	封片剂	5ml	RTU	室温
11	对照切片	1 张	RTU	室温
12	说明书	1 张

石蜡包埋组织的免疫组织化学方案
1. 脱蜡水化
石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡 3 次，每次 15 min；依次置于不同浓度（100%、95%、90%、80%、70%）乙醇浸泡各 5 min，再置于蒸馏水洗涤 5 min，重复 3 次。
2. 抗原修复
沸水浴修复：将100×抗原修复缓冲液（试剂 2）用蒸馏水稀释成 1×抗原修复缓冲液，放入修复盒中并提前加热至95-100℃（注意盖好以防液体蒸发），然后将切片放入修复盒中，在沸水浴环境中保持外沸状态 15 min，室温自然冷却；用PBS缓冲液（试剂 1，将干粉溶解在 2L 蒸馏水中）清洗 5 min，重复 3 次。
3. 阻断内源性过氧化物酶
用吸水纸吸去玻片上多余的液体，用免疫组化笔在组织周围画圈，加入2-4滴内源性过氧化物酶阻断剂（试剂 3），室温下置于湿盒中孵育 15 min，用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。
4. 血清封闭
用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入2-4滴封闭工作液（试剂 4），置于湿盒内 37℃封闭 20 min，以减少非特异性染色。
5. 一抗孵育
用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入2-4 滴多抗工作液（试剂 5），置于湿盒中，4℃孵育过夜或 37℃孵育 1-2 h。
6. 复温
4℃孵育过夜后，室温下复温 15 min（若在室温下孵育一抗，则直接进入下一步清洗）；用 PBS 洗涤 5 min，重复3 次。
7. 二抗孵育
用吸水纸吸玻片上多余的液体，加入2-4滴HRP标记羊抗兔IgG工作液（试剂 6），置于湿盒中，37℃孵育 1-2 h；用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。
8. 显色
用吸水纸吸去玻片上多余的液体，在每张切片上滴加约50μL新配制的DAB工作液（试剂 7:试剂 8:PBS=1:1:18），作用 3-5 min。显微镜下观察结果，达到合适的显色强度后，用蒸馏水冲洗切片以终止反应，用蒸馏水冲洗 5 min，重复 3 次。
9. 复染
滴加适量复染试剂（试剂 9）复染 3-5 min，蒸馏水冲洗 5 min，滴加盐酸酒精分化约 30 s，蒸馏水洗涤 5 min，重复 2 次。

10. 脱水封片

将玻片依次置于不同浓度（70%、80%、90%、95%、100%）乙醇，各 5 min；然后置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡3 次，每次 15 min。用吸水纸吸去多余的二甲苯，滴加适量封片剂（试剂 10）在组织上，将盖玻片盖在组织上，避免产生气泡。
注意事项
1. 建议检测时进行阴性及阳性对照，以提高实验的可靠性。
2. 本品中的配套试剂，请不要用其他生产商产品替换使用。
3. DAB 为致癌物质，请采取必要的防范措施。
4. PBS 洗涤液（试剂 1）配制后在 4℃可保存一周；抗原修复液（试剂 2）及显色剂（试剂 7 和 8）的工作液需每次实验时现用现配。