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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
30
- 英文名:
lactic acid,LA
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/48样
微量法100T/48S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理:
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙/酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+,H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质,在530nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体110mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体2mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入0.6mL蒸馏水充分溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加6mL蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1支,4℃避光保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃保存。
显色液:临用前根据用量按照提取液(V):试剂三(V):试剂四(V):试剂五(m)=1(mL):0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,试剂盒中带有4个棕色空瓶)
样本处理:
- 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取上清测定。
- 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取上清测定。
- 血清:直接测定。
测定操作:
| 样品对照管 | 样品测定管 | 标准对照管 | 标准测定管 | |
| 样品(μL) | 10 | 10 | ||
| 标准品(μL) | 10 | 10 | ||
| H2O(μL) | 60 | 90 | 60 | 90 |
| 试剂一(μL) | 30 | 30 | ||
| 试剂二(μL) | 40 | 40 | 40 | 40 |
| 显色液(μL) | 60 | 60 | 60 | 60 |
| 充分混匀,于37℃反应30min,于微量石英比色皿/96孔板,测定530nm处吸光值,分别记为A1,A2,A3,A4,△A样=A2-A1;△A标= A4-A3 | ||||
计算公式:
1. 按照蛋白含量计算
LA含量(μmol/mg prot)= △A样÷△A标×C标÷ Cpr
= 2×△A样÷△A标÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
LA含量(μmol/g 鲜重)= △A样÷△A标×C标÷ W
= 2×△A样÷△A标÷ W
- 按照细胞数量计算
= 2×△A样÷△A标÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
LA含量(μmol/mL)= △A样÷△A标×C标
= 2×△A样÷△A标
C标:标准品浓度,2mmol/L;W:样本质量,g/mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL
注意事项:
- 若吸光值超过2,请进行适当的稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
- 最低检出限为1.8μmol/L。
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文献和实验α -羟基丙酸。 L型(见图)为厌氧糖酵解的最终产物,是由乳酸脱氧酶的作用使丙酮酸还原而生成的。在激烈的肌肉运动时,乳酸在肌肉中积累,其一部分随血液流到肝脏,再合成为葡萄糖(糖的产生)。在乳酸菌的乳酸发酵和大肠杆菌、梭状芽胞杆菌属的混合有机酸发酵过程中也能大量形成乳酸,为酸乳酪( yoghurt)和咸菜的酸味的主要成分。这里因生物种类不同,有时可产生 L型、 D型和外消旋体。在动物和微生物中是作为碳源而被利用的物质之一。
指糖经无氧酵解而生成乳酸的发酵。与乙醇发酵同为生物体内二种主要的发酵形式。在动物组织中,除特殊的内脏外,几乎所有的组织都具有进行这种发酵的性质,此过程称为糖酵解。微生物中具有代表性的乳酸发酵是米根霉( Rhizopus oryzae)等霉菌类。细菌中则是乳酸杆菌。在乳酸杆菌发酵过程中仅从糖类制造乳酸的,称为同质乳酸发酵菌。链球菌,双球菌,小球菌,乳杆菌属( Lactobacillus)等和一部分乳酸杆菌均属此类。除乳酸以外,还产生乙醇、乙酸和二氧化碳等副产品称为异质乳酸
它是一种同化糖的能力很强的乳酸发酵细菌,有球菌和杆菌。一般耐酸能力强( pH 3— 4)。革兰氏染色阳性。为兼性厌氧性(在自然状态下一般是微好氧性)或厌氧性( rH=5— 6, pH=5左右, Eh=0.01— 0.75V)。厌氧性乳酸菌靠黄素酶进行呼吸。因为缺乏接触酶,所以积累过氧化氢。一般寄生于动物体或附着在植物体上生长。除链球菌属几个种外均无致病性。无论球菌或是杆菌多成对地由一端或一侧粘接成为双杆( d: plo)型或二裂( b: f: d)型,以至链状或栅状连接。除发酵葡萄糖外
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