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99
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上海源叶生物科技有限公司
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500ml
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文献和实验4.0。(2) 10×磷酸盐-NaCl 缓冲液(PBS):100mmol/L PBS,pH7.4。称NaCl 80g、Na2HPO412H2O 29g、KCl 2g、KH2PO4 2g,加蒸馏水溶解,加入100mmol/L EDTA 20ml,用去离子水定容至l000ml。(3) 透析液 10mmol/L Na2HPO4-KH2PO4缓冲液,含15mmol/L NaCl,pH7.2。(4) 硫酸铵。(5) 辛酸。四、操作步骤 1、抗血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释,用0.1mol/L NaOH调至血清
入20.9g MOPs,放在磁力搅拌器上溶解。再加1.86g EDTA二水二钠,放在磁力搅拌器上溶解。用1M灭过菌的NaOH 调PH至7.0(约用NaOH 40ml),用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml,装入棕色瓶中,写好标签,室温避光保存。4、5 × 甲醛变性胶加样缓冲液(5×loading buffer): 配制10ml。预先配制水饱和的溴酚蓝溶液:在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝,加入1ml DEPC水溶解,充分振荡溶解,离心,可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余,上层液体
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果,条带不好,请大家指点!
核蛋白提取: (1)5 millions个离心收集 (2)弃上清,细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液,4℃下2000 rpm离心5min。 (3)弃上清,沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集,再悬于0.5 ml Buffer A。 (4)冰上放置10分钟,加入NP40使终浓度为0.5%,混匀后,轻摇20秒。 (5)4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 (6)重悬于50µl Buffer B,于冰上强烈振荡15分钟,4℃下16300×g离心10分钟
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