小鼠急性胰腺炎模型

小鼠急性胰腺炎模型：

急性胰腺炎(Acute pancreatitis, AP)是临床上常见的急腹症，病因复杂，病死率达5%~10%，重症AP死亡率高达20%~30%，目前发病机制尚未阐述，无特殊治疗方式。目前活体AP动物模型制作常用方法大致有胰管结扎法、十二指肠闭袢法、胰胆管穿刺注射法、胰腺被膜下注射法、胰胆管注射法结合静脉输注法、蛙皮素联用脂多糖腹腔内注射法等。
雨蛙素(Caerulein)是一种功能和组成上类似于胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)的胃调节分子，刺激胰腺腺泡细胞过度分泌，使细胞内的胰蛋白酶原和溶酶体水解酶分离障碍，经组织蛋白酶 B依赖性的方式激活，胰酶的活性又能够进一步导致酶原激活，引起一系列蛋白酶活性导致的细胞损害。胰腺组织自我消化引起的炎症反应募集炎症细胞，释放炎症因子，进一步引起局部甚至全身性的严重炎症反应。
雨蛙素诱导的AP模型已经成功运用于大鼠、小鼠、狗和叙利亚仓鼠等动物AP模型的建立，该模型有助于描述自噬受损、病理性钙信号传导和内质网应激的过程，这些是AP发病机制的核心。可以通过调整雨蛙素的给药方案来增加急性胰腺炎的严重程度。

小鼠急性胰腺炎模型：

1.实验动物：
雨蛙素可以诱导大多数动物发生AP，但是此类模型主要应用于啮齿类动物（如大鼠和小鼠）。本实验采用SPF级C57BL/6小鼠，雄性，周龄为8w-10w，体重为20g-25g。

2.雨蛙素的配制：

取1 mg的雨蛙素溶于1 mL生理盐水中，配制成1 mg/mL母液，0.22 μm滤膜过滤除菌，冻存。使用前解冻，用生理盐水稀释成5 μg/mL或10 μg/mL的工作液。

3.给药方式:

雨蛙素诱导的AP多为水肿型，多用于轻症AP以及轻症AP转变为SAP研究。雨蛙素诱导重症AP时，往往联合LPS(lipopolysaccharide，LPS)，LPS破坏炎症介质的正常反应，进而发展局部的胰腺炎为全身性的严重性炎症反应，加重在雨蛙素诱发基础上的胰腺炎。以1小时间隔腹腔注射7次雨蛙素(20-100 μg/kg，常用浓度50 μg/kg)，并在最后一次同时注LPS (10 mg/kg)。
在建模成功后，处死各组动物，取新鲜胰腺组织。固定于4%甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内，随后进行脱水，固定，包埋和切片。进行HE和masson染色，判断胰腺纤维化程度。

模型评价：

1、血清淀粉酶和脂肪酶活性上升；
2、血清中NO浓度升高；
3、胰腺病理学检测：胰腺组织水肿有空泡、炎性细胞浸润，同时伴有少量腺细胞坏死，可能有出血；
4、血清和胰腺组织中炎症因子表达水平增高；
5.组织病理学：
HE染色结果：模型组跟对照组组相比胰岛细胞脂肪样空泡变性，部分腺泡细胞疏松水肿，部分腺泡细胞鹰眼样巨细胞病变。
Masson染色结果：模型组与对照组相比胰腺血管周边和胰岛纤维化，胰岛细胞脂肪样空泡变性，腺泡细胞也发生淀粉样变性。

模型优点：

方法操作简便，容易复制，重复性好，无创。
 

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