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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20℃
- 英文名:
pAAV-CMV-mCherry-U6-sgRNA
- 库存:
999
- 供应商:
圻明生物
- 规格:
瓶
使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
上海圻明更多优势供应质粒
pCMV-IRF1(human)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCAG-3×FLAG-OR2AK2(human)-EGFP-StrepII 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp 绿色
pCMV-Plau(mouse)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pDC316-H3f3a(mouse)-3×FLAG 哺乳细胞,腺病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp
pLV3-CMV-IMP3(human)-3×FLAG-mCherry-Blast 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 人 Amp Blast 红色
pCMV-BZW2(human)-cECFP-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-ACAA1(human)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-streptavidin-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF Amp Neo/G418
pCMV-LMBR1L(human)-nCerulean-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-GSK3B(human)-VN173-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pDC316-MCMV-Slc16a1(mouse)-3×FLAG 哺乳细胞,腺病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp
pDC316-MCMV-Slc16a3(mouse)-3×FLAG 哺乳细胞,腺病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp
pCMV-Gabpa(mouse)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pLV3-CMV-TRIM72(human)-3×FLAG-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 人 Amp Puro
pLV3-U6-SREBF1(human)-3UTR-shRNA2-CopGFP-Puro 哺乳细胞,慢病毒 干扰沉默 shRNA 人 Amp Puro 绿色
pLV3-SFFV-Grm7(mouse)-FLAG-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp Puro
pLV3-H1-2O2-MAF(human)-shRNA1-TetR-Puro 哺乳细胞,慢病毒 干扰沉默,四环素诱导 shRNA 人 Amp Puro
pLV3-CMV-circSIPA1L1(human)-CopGFP-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 circRNA 人 Amp Puro 绿色
pLV3-CMV-PIK3CA(human)-6×His-3×FLAG-CopGFP-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 人 Amp Puro 绿色
pGEN-luxCDABE-Chl 大肠杆菌 基因表达 ORF Chl
pCMV-CNOT2(human)-EGFP-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Kan Neo/G418 绿色
pCMV-RAD51(human)-EGFP-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Kan Neo/G418 绿色
pCMV-3×NLS-mOrange2-MCS-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 空载体 Kan Neo/G418 橙色
pCMV-3×NLS-mCherry-OIP5(human)-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Kan Neo/G418 红色
pT7-DPYSL3(human)-6×His(低拷贝) 大肠杆菌 基因表达 ORF 人 Amp
pBluescript II KS(-) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 空载体 Amp
pRSF-pLtetO-GFP-Cam 大肠杆菌 基因表达 ORF Chl 绿色
pCMV-GST-CVB3(virus)-EGFP-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 病毒 Amp Neo/G418 绿色
pCMV-SHOC2(human)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-FCGR3B(human)-3×FLAG-BGH-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-H3-4(human)-3×HA-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-Sox17(mouse)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pLV2-Tight-FOXG1(human) 哺乳细胞,慢病毒 基因表达,四环素诱导 ORF 人 Amp
pLV3-CMV-TRIM22(human)-3×HA-CopGFP-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 人 Amp Puro 绿色
pCMV-Arid3a(mouse)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pCMV-PHEX(human)-3×Myc-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-Gabbr1(mouse)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pCMV-LYPLA1(human)-3×FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pFastBac1-GST-NUAK2(human) 昆虫细胞 基因表达 ORF 人 Amp,Gen
pCMV-H2AC4(human)-3×HA-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
PiggyBac-CMV-GRIN1(human)-Neo 哺乳细胞 基因表达,转座 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-H2BC21(human)-3×HA-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCMV-COMP(human)-6×His-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pCAG-3×FLAG-OR2T11(human)-EGFP-StrepII 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp 绿色
pLV3-CMV-CD99(human)-2-3×FLAG-CopGFP-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 人 Amp Puro 绿色
pCMV-Rnf2(mouse)-6×His-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 小鼠 Amp Neo/G418
pLV3-U6-FAM136A(human)-sgRNA5-Cas9-mCherry-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因敲除 CRISPR,Cas9,sgRNA 人 Amp Puro 红色
pLV2-CMV-EGFP-En1(mouse)-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp Puro 绿色
pFastBac1-GST-ULK2(human) 昆虫细胞 基因表达 ORF 人 Amp,Gen
pFastBac1-GST-ULK1(human) 昆虫细胞 基因表达 ORF 人 Amp,Gen
pAAV-CAG-Ide(mouse)-HA 哺乳细胞,腺相关病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp
pCMV-GST-USP28(human)-mCherry-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418 红色
pLV2-CMV-Trim5(mouse)-FLAG-Puro 哺乳细胞,慢病毒 基因表达 ORF 小鼠 Amp Puro
pCMV-PDGFRB(human)-FLAG-Neo 哺乳细胞 基因表达 ORF 人 Amp Neo/G418
pM7(mouse)-Fluc 哺乳细胞 荧光素酶报告 Promoter 小鼠 Amp Fluc
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文献和实验的表达质粒。A)PCR 扩增的方法U6:来源于人 U6 小核启动子,常用小 RNA 表达,转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面,利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9(Cas9 表达质粒)中,一起共转。B)sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列(2000 bp)找到的序列如下:将上面复制的序列粘贴到 blast 中
CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统, 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质, 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统, 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性,使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA,两个相近的切口造成 DNA 双链断裂, 诱导细胞发生非同源末端连接修复, 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑,首先要构建有效的 sgRNA
CRISPR-Cas9 全程实操教程:从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
的原件与表达 Cas9 的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行基因操作,在 PAM (5'-NGG) 上游~3bp 进行切割,如下图所示。因此本实验的关键步骤是设计一对 20bp(不包括 NGG 在内的)完全互补的 oligo 插入到如上图所示的 filler。另 U6 启动子需要 5' 端的 G 起始转录,因此若设计的 oligo 第一个碱基非 G,需额外增加一个 G。操作详细流程1. 设计 sgRNA关于 sgRNA 的设计我们有专门开过一篇文章《一文掌握
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