masson染色

masson染色

Masson三色染色是结缔组织染色中最经典的一种方法,又称马松染色,是显示组织中纤维的主要方法之一,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

一、Masson染色

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关,分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而,淡绿或苯胺蓝的分子量都很大,因此Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

二、病理诊断意义

(1)器官硬化性疾病的观察:如肝硬变、心肌瘢痕的观察,胶原染色更易于观察诊断。

(2)瘢痕与淀粉样物质鉴别:前者胶原纤维染色为阳性,后者为阴性。

(3)骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别:利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱,纵横交错,后者较规则。

样本要求:组织片充分固定和脱蜡。

三、实验目的

Masson三色染色方法,是胶原纤维和肌纤维的染色方法,能够对组织和病理组织进行胶原结构的观察。

四、实验原理

由mallory三色染色改造,利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色,与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色,便可把不同组织成份显示出来。

五、实验材料和试剂:

1. Weigert氏铁苏木素液 (见ku味酸——酸性品红法

2.丽春红酸性品红液

丽春红(Ponceau 2R 0.7g

酸性品红(acid fuchsin 0.3g

蒸馏水 99ml

 冰cu酸(glacial acetic acid 1ml

3. 1%磷钼酸水溶液

磷钼酸(phosphomolybdic acid 1g

蒸馏水加至 100ml

4. 2%苯胺蓝液

苯胺蓝(aniline blue 2g

 冰cu酸(glacial acetic acid 2ml

蒸馏水加至 100ml

5. 亮绿液

亮绿(light green) 1g

蒸馏水 99ml

冰cu酸(glacial acetic acid )1ml

六、染色步骤与方法:

1. 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。

2. 切片脱蜡至水。

如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:

(1) 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。

(2) 稍水洗

(3) 5%硫代硫酸钠作用5分钟。

(4) 流水冲洗10分钟

3. Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

4. 流水稍洗。

5. 1%盐酸酒精分化。

6. 流水冲洗数分钟。

7. 丽春红酸性品红液染5-10分钟。

8. 蒸馏水稍冲洗。

9. 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。

10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。

11.1%冰cu酸处理1分钟。

12.95%酒精脱水多次。

13. wu水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固

七、结果判读

▲胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色;

▲胞浆、肌肉、纤维素、红细胞呈红色;

▲胞核蓝黑色。

八、注意事项

1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色；

2.铁苏木素染核；

3.如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制；

4.用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可；

5. 1%的磷钼酸水溶液的作用一方面是使染上红色的胶原纤维被分化成无色或淡红色,而肌纤维、纤维素等仍呈鲜红色;另一方面对胶原纤维又起媒染作用,使胶原纤维与大分子染料的苯胺蓝液较易结合;

6. 1%的磷钼酸水溶液要经常换,溶液明显变色了就需要更换了；

7. 苯胺蓝和丽春红要充分溶解然后过滤使用,不过滤的染液里面杂质过多,会阻碍染液和组织的结合紧密程度;

8. 媒染后取出流水冲洗时间不宜过长,时间过长会导致染色效果整体偏淡;

9. 丽春红染完后水洗速度要快,并且进入磷钼酸前尽量将水甩干。