人源心肌细胞(IPSC诱导心肌细胞)
产品基本信息
细胞名称:人源心肌细胞(IPSC诱导心肌细胞)
种属来源:人
传代特征:心肌细胞是终末分化的功能细胞,与人体内的心肌细胞性质相同,不能增殖扩增生长特性:贴壁生长
细胞冻存:冻存细胞存于-80℃冰箱,2周有效期;长期需液氮储存
培养基::专用培养基
生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
产品优势:高纯度人源细胞:与传统鼠源心肌细胞不同,心肌细胞是一种高纯度的体外人源细胞。严格的质检把控,确保心肌细胞纯度达95%以上。特有人类心肌细胞属性。
动作电位:具备正常人类心脏的标准电生理学特征,受到电刺激后产生搏动。
收缩功能:具备正常人类心脏的电收缩偶联,具备心脏特有的收缩功能,自主搏动节律接近成人窦性心律。
离子通道:具备正常人类心肌细胞的绝大部分离子通道,为科学研究提供更准确的模型疾病特异型细胞通过重编程疾病特异型体细胞,例如表皮成纤维细胞及CD34+血细胞。细胞培养操作
1)复苏细胞:a.将心肌细胞复苏液从4°C冰箱中取出,室温平衡30分钟。
b.打开水浴锅,设定温度为37°C。
c.开启生物安全柜进行紫外灭菌30分种。
d.在冰上将1ml心肌细胞铺板液加入6孔板的一个孔中(0.1ml/cm 2 ),随即前后左右晃动6孔板,使铺板液均匀覆盖孔的表面。
e.将剩余铺板液迅速放回冰箱,将6孔板放入细胞培养箱中孵育1小时。
f.取出孵育好的6孔板,放于生物安全柜中,吸除心肌细胞铺板液后,立刻在孔内加入1ml 心肌细胞复苏液。
g.从高效液氮储存罐中取出需要复苏的细胞,将其放于干冰中暂存。
h.从干冰中取出细胞,迅速将冻存管的下1/2没入水浴锅中,轻柔晃动1-2分钟至管中仅剩一小块冰时,将其取出。
i.75%酒精擦拭冻存管表面后,将其放入生物安全柜中,拧开管盖,用1ml枪尖轻柔的将管中液体尽可能多的转移至15ml离心管中,用1ml心肌细胞复苏液轻柔冲洗冻存管,以5秒钟一滴的速度将冲洗液缓慢滴加入15ml离心管,边滴加边轻柔晃动离心管。
j.再用枪尖以同样速度,滴加1ml心肌细胞复苏液至15ml离心管,边滴加边轻柔晃动离心管。
k.用移液管由慢(2秒钟一滴)到快的滴加9ml心肌细胞复苏液,同时轻柔晃动离心管。300g离心5分钟。
l.在生物安全柜内吸除上清,用2ml移液管取1ml心肌细胞复苏液轻柔吹打细胞沉淀3-5次后,将其加入6孔板中,前后左右十字晃动混匀(可按比例稀释计数)。
m.显微镜下观察,细胞均匀分布。
n.在6孔板上标记好细胞名称、日期以及操作人员后,将其放入细胞培养箱,再次前后左右晃动混匀,放入细胞培养箱种培养24-48小时至绝大多数细胞贴壁后即可换液为心肌细胞培养基。
重要提醒:心肌细胞复苏计数后,可按需求接种至需要的培养容器;
心肌细胞培养时,按照推荐的密度接种,能够抑制成纤维细胞生长速度;
重要提醒:心肌细胞复跳后,建议继续培养1-2天稳定细胞状态。