- ￥280
- 优利科
- YLK0122
- 国产
- 2025年12月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
ADH
- CAS号：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
中文名称：乙醇脱氢酶（ADH）测试盒/紫外分光光度法
货号：YLK0122
测试方法：紫外分光光度法
产品规格：50管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义： ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着 重要作用。哺乳动物 ADH 主要在肝脏生成，肝脏损伤导致 ADH 释放到血清中。血清 ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理： ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+，NADH 在 340nm 处有吸收峰，而 NAD+没有； 测定 340nm 吸光度下降速率，来计算 ADH 活性。
自备仪器和用品： 研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制： 试剂一：液体×1 瓶，室温保存。 试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×2 瓶，－20℃保存。临用前加入 22mL 试剂二，现配现用。 试剂四：液体×1 支，4℃保存。
本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
粗酶液提取：
1、 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2、 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；16000g， 4℃离心 20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH 测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三在 25℃水浴中保温 30 min。
3. 在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 样本上清液、800μL 试剂三和 100μL 试剂四，迅速 混匀后于 340nm 测定吸光值变化，分别记录 15s 和 75s 时吸光值，分别记为 A1 和 A2。 △A 测定管=A1-A2。
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文献和实验=A×K×4/10×n=2/5×A×K×n…………………(A3) 式中：X——样品的酶活力，u/g(u/mL); A——样品平行试验的平均吸光度; K——吸光常数; 4——反应试剂的总体积，mL; 10——反应时间10min，以1min计; n——稀释倍数。 所得结果表示至整数。 6 结果的允许差 平行试验相对误差不得超过3%。 紫外分光光度法(第二法) 1 原理
管加入。最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量（微克）和测得的吸光度值。 folin―酚试剂法实验表 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白质 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 （250mg/ml） 未知蛋白质 0.2 0.4 0.6 （约250mg/ml） 蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4 试剂甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 试剂乙
加入。 2. 试剂乙：与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。 3. 标准蛋白质溶液：同基本法。 （二）操作步骤 测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴中保温5分钟。用流动水冷却后，在660nm下测定其吸光度值。 改良的快速简易法，可获得与 Folin—酚试剂法（即Lowry基本法）相接近的结果。 五、考马斯亮兰法（Bradford法） （一）实验原理 双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法
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