- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM1033345
- 2026年10月29日
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90天
- 英文名：
pTagBFP-3×Linker-MCS
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100
- 供应商：
科淼生物
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0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pTagBFP-3×Linker-MCS
货号：KM1033345
图谱：微客服
宿主：哺乳细胞
用途：蛋白表达
片段类型：ORF
片段物种：空载体
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光标记：蓝色
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文献和实验相关专题 4.1 实验原理 4.1.1 DNA的连接策略 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段，然后体外使两者相连接，再用所得到重组 质粒转化细菌，即可完成。 外源DNA片段和质粒载体 的连接反应策略有以下几种： （1）互补性粘性末端的连接 单一限制
(3)平头末端的连接 是由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生，或由DNA聚合酶 补平所致。由于平端的连接效率比粘性末端要低得多，故在其连接反应中，T4 DNA连接 酶的浓度和外源DNA及载体DNA浓度均要高得多。通常还需加入低浓度的聚乙二醇(PEG 8000)以促进DNA分子凝聚成聚集体的物质以提高转化效率。特殊情况下，外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配，则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配
片段必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中,但是在连接反应时,外源DNA和质粒都可能发生环化,也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平，此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的
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