- ￥4138
- 翌圣生物（Yeasen）
- 20589ES03
- 上海
- 2025年11月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Anti-His Affinity Gel
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
1mL
Anti-His Affinity Gel（Anit-His亲和纯化凝胶）由高质量的鼠源 IgG1单克隆抗体与sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，本产品具有较高的His标签融合蛋白加载容量（至少为1.1 mg protein/mL凝胶），杂蛋白非特异结合少，可用于带有His标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化。
Yeasen生物提供的Anit-His亲和纯化凝胶可用于纯化N-端、C-端、4×His、5×His、6×His融合蛋白。
产品性质
| 亚型（Isotype） | Mouse IgG1 |
| 纯化方法（Purity） | Protein A |
| 抗体浓度（Antibody Concentration） | 7.5 g抗体/L凝胶 |
| 应用（Application） | 蛋白纯化，免疫沉淀（IP） |
| 蛋白结合量（Protein） | ≥1.1 mg蛋白/mL凝胶 |
| 储存缓冲液（Buffer） | TBS，50%甘油，pH 7.4，含有0.02%（w/v）NAN3 |
运输和保存方法
冰袋运输。未开封的产品在-20℃下可稳定保存1年。禁止在不含甘油的溶液中冻存。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用方法（所有离心操作都在4℃进行）
1）轻微重悬Anti-His Affinity Gel，形成均一溶液。转移40-100 μL混合液（20-50 μL gel）至新的离心管中。
2）加入500 μL PBS，轻轻的重悬Anti-His Affinity Gel，10,000 rpm 离心60 s, 弃上清，重复上述步骤2次。
注意：尽可能去除上清，但不要吸到凝胶。
3）加入100 μL细胞裂解液，混匀。室温孵育至少1小时，边孵育边轻摇。
4）10,000 rpm 离心60 s，去除上清。可将上清液转移到新的离心管中保存以后检测。
5）沉淀用0.5 mL PBST 洗 3-4 次，10,000 rpm 离心60 s，去尽上清。
6）加入40 μL 2×蛋白上样缓冲液，煮沸10 min。10,000 rpm 离心60 s，小心转移上清，用于SDS-PAGE检测。
HB230112
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文献和实验蛋白等） 可以完成一般方法很难完成的分离，如变性和非变性蛋白、功能不同的蛋白的分离 属于一种吸附层析，载量高，具有高效的捕获和浓缩作用。 基本步骤 亲和层析作为一种吸附性层析，主要步骤包括平衡、上样、清洗、洗脱和再平衡步骤 （图10)。由于亲和作用需要在特定的条件下结合和洗脱，亲和层析需要使用特定的结合缓冲液和洗脱缓冲液。 图10 亲和层析的基本步骤 适用性 带有标签的融合蛋白纯化，如His标签蛋白、GST标签蛋白等。 抗体及抗体片段的纯化 其他和某些配基有特异性结合作用的分子的纯化
离子浓度、添加剂（如5%甘油、1mM DTT）等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-12个His），增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分 原因
表达 • N端带有6×His标签，在Ni-NTA上进行一步亲和纯化， 利用TAGZyme™可去除6×His标签 • 可表达无标签蛋白，利用Nde I酶切，再连接去除His标签 • C端内置琥珀终止密码子，可利用EasyXpress Site-Specific Biotin Kit进行生物素标记 • 卡那霉素抗性用于筛选 图1 QIAgenes expression vector – E.coli QIAgenes表达载体有效提高蛋白表达量 说了这么多，还是通过实验数据来具体
