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什么是高斯萤光素酶?
高斯萤光素酶(Gaussia luciferase)是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。高斯萤光素酶为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kDa),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。
优点:
▶ 自然分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无需裂解细胞,检测便捷快速,更适用于报告基因不同时间点的检测和高通量筛选;
▶ 发光强度高,可达到萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的萤光信号的1000多倍,具有更高的检测灵敏度;
▶ 反应无须ATP,不受ATP影响;
▶ 稳定性好,对温度和pH的耐受性强,可适用于多种培养基。
高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG021)
Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG072)
二者均是以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测分泌型、非ATP依赖的高斯萤光素酶(Gaussia luciferase,简称Gluc)活性的检测试剂盒,不同的是,RG072可以无需收集细胞或细胞培养上清,只需将与培养液等体积的检测工作液直接加入到细胞培养板内反应5-10分钟,即可进行化学发光检测,使用更便捷。RG021适用于细胞培养上清样品的检测,也可以用于细胞裂解样品或纯化的酶的检测。
检测效果:
图1. 碧云天高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)和国外同类产品(Competitor T)对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)的293T细胞的检测效果。
图2. 碧云天Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)的293T细胞的检测效果。
产品特点:
发光强度高:对于相同的细胞上清样品,RG021的发光效果比国外同类产品(Competitor T)强约20% (图1A);对于相同的细胞裂解样品,RG021的发光效果是国外同类产品(Competitor T)的10-50倍;
发光信号非常稳定:RG021发光信号在10分钟内波动不超过15%,反应30分钟内信号波动不超过30%,信号半衰期大于60分钟(图1C);RG072发光信号在30分钟内基本恒定,在60分钟内信号波动不超过10%,在120分钟内信号波动不超过20% (图2B),信号半衰期长达5小时之久,特别适用于96或384孔板中高斯萤光素酶活性的大批量测定;
检测速度快:RG021可直接取上清进行检测,仅需将配制好的检测工作液与5-20微升样品混合,反应5-10分钟后即可进行化学发光检测;RG072无需取细胞上清,也无需去上清后裂解细胞,仅需将配制好的检测工作液与培养细胞等体积混合,反应5-10分钟后即可进行化学发光检测,使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测;
稳定性好:检测缓冲液稳定性非常好,反复冻融10次、4℃保存7天或37℃保存1天对检测效果基本无影响,37℃保存3天检测效果下降不超过5%;检测底物在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不超过10%,室温保存3天、37℃保存1天,仍可保留80%以上的检测效果;
使用灵活便捷:不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测;RG021不仅可以用于细胞上清样品的检测,也可以用于细胞裂解样品的检测;RG072的检测工作液不仅可以等体积加入到细胞培养孔中进行直接检测,也可以用于细胞培养上清样品的检测,还可以用于高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135)制备的细胞样品的检测。
兼容性强:兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇、萤光素酶抑制剂等对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
我们还为您准备了高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135),使用高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)时,如果需要更多的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液,可以使用本产品。使用Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)时,如果希望用于检测细胞裂解样品,也可以使用本产品。
同时,碧云天还可提供高斯萤光素酶报告基因的空载体质粒和直接使用的报告基因质粒,搭配使用,实验更安心哦!
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文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中,我把一个基因的一部分启动子插入到载体中(包含该基因转录起始点),请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变,而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢?比如所包含启动子区域为-1000!~+27(此处是否必须为3的整倍数) woxingwosu 我觉得只要从翻译开始,即ATG, 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶,底物因荧光素酶的类型而不同(如荧光素)。 常用荧光素酶信息表: 其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为萤火虫荧光素酶(FLuc)和海肾荧光素酶(RLuc),同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶(GLuc)。 萤火虫荧光素酶(FLuc)作为最通用和最常见的报告基因,该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性,可用于原核和真核细胞。FLuc
、RNA剪接研究。 萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线,从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响,使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶,两者没有种源同源性并对应不同的反应底物,故而没有交叉干扰。得益于超强的光
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