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microRNA PCR实验代
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上海信帆生物科技有限公司
microRNA PCR实验代测
它广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中,调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达。MiRNA的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生,在多种癌症中,miRNA的表达水平会发生明显改变,有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外,在许多其他的病变组织和细胞中也检测到了miRNA的异常表达。因此对miRNA的表达的研究具有重要意义。荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测miRNA的基因表达水平。备注:
1、大部分基因特征前缀为:2、需要确认基因是3p还是5p;送样运输要求:1. 样品处理a) 动物组织:常规组织100mg,脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加。将组织剪切成合适大小后(建议组织块长宽高均不大于0.5 cm),然后迅速完全浸泡于5~10倍体积的RNAsolidTM试剂中。(注意:已浸入RNAsolidTM试剂中的组织经平衡一段时间后,可从溶液中取出,切成更小的组织块,再重新放回RNAsolidTM试剂中;有些比较弱的液体渗透性组织如骨头等,不适合用RNAsolidTM试剂进行RNA保护。)b) 植物组织:新鲜的叶、果肉、种子等最少100 mg。将嫩叶,嫩茎组织切成合适的大小(建议长宽高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完全浸泡于5~10倍体积的RNAsolidTM试剂中。(注意:某些植物组织天生具有的屏障,如叶子表面的蜡层可阻碍RNAsolidTM试剂的渗透,对于此类组织,通常需破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。)c) 细胞等样本:收集不小于10^6个细胞的沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后迅速加入5~10倍体积的RNAsolidTM试剂。d) 酵母、细菌等样本:离心弃上清,收集小米粒大小的单菌体沉淀,然后迅速加入适量的RNAsolidTM试剂完全浸没菌体沉淀。e)全血:最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20度运输。f)血清:最少1 mL,干冰运输。g) RNA样品: OD260/280为1.8-2.0,浓度≥100 ng/μL,体积≥20μL,干冰运输。h)cDNA(必须能检测miRNA基因):cDNA原液≥20 μL,干冰运输。1.MiRNA的实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测运用成熟的实时定量PCR技术准确、快速地定量检测各种组织、原代细胞及细胞系中目的microRNA的表达情况,具有灵敏度高、实验周期短和特异性高等特点2.MicroRNA Array利用集成在384孔板上的引物和探针组合来检测人类、大鼠或小鼠的miRNA表达谱,只需1个工作日就能产生覆盖Sanger miRBase的综合数据集。采用TaqMan探针原理,结果准确可靠,样品无需做重复试验。3.特定类型疾病miRNA表达检测MiRNA的表达检测对监测肿瘤的发生发展和各种治疗手段的效果有重要意义,作为指导个体化药物选择的生物标记具有很大的临床应用潜力。我们针对肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤相关标志性miRNA进行荧光定量检测。4.Northern BlottingMicroRNA工作的高品质文章历来注重使用Northern blotting技术检测microRNA的表达,许多实验室限于条件及Northern杂交的难度无法完成该项工作,本公司携手国内外数个实验室推出同位素标记的Northern杂交服务。
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