核酸共转染试剂

产品介绍

核酸共转染试剂盒是我们研发的专门用于将质粒 DNA、siRNA 或 mimics 共同转染于同一细胞的试剂盒。它具有非常卓越的转染性能，可将质粒 DNA 和 siRNA 高效地共转染于绝大多数贴壁细胞和原代细胞。在贴壁细胞中，质粒 DNA 转染效率可高达 90%以上，siRNA 在质粒转染阳性细胞中共转染效率可高达 95%以上。其功能强大，不仅可高效转染质粒 DNA 和 siRNA，还可高效转染 mRNA、mimics、反义核酸和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，我们的共转染试剂 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后 24 小时细胞死亡率不到 10%。使用也非常方便，先将转染试剂与质粒 DNA 和 siRNA 混合，再将该转染复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

产品特点：

1、卓越的质粒DNA与siRNA共转染性能，可高效转染多种贴壁细胞和原代细胞，质粒DNA转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上，siRNA在质粒转

染阳性细胞中共转染效率高达95%以上；

2、共转染功能强大，不仅可将质粒DNA与siRNA共转染于同一细胞，还可共转染mRNA、mimics、反义核酸于同一细胞；

3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响。

操作步骤（以 24 孔板转染为例）:

A、 细胞接种:

1、转染前一天对细胞进行转接，每孔接种1.5×105个细胞，使转染时细胞密度为80-90%，且生长良好（非常重要）；

2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
 

B、试剂A转染复合物制备（该步完成后应立即进行转染）：

1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀，室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的DNA，轻轻混匀，之后再加入适量的siRNA，见附表。用移液器再次轻轻 混匀，室温静置5分钟。

3、将DNA-siRNA-培养基混合物滴加至试剂A-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15~20分钟，立即转染。注意：试剂A-培养基混合物和DNA-siRNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
 

C、转染:

1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2、 培养24-48小时后观察或进行下一步实验。

3、试剂A在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
 

注意事项：

1、 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，siRNA用量15pmol，试剂A可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul进行优化。或者，每孔质粒用量0.8ug，试剂A用量2.5ul，siRNA用量选择10pmol、15pmol、20pmol、25pmol进行优化。
 

2、 在制备DNA-siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清，因血清会干扰试剂A与DNA、siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。
 

附表 1：不同培养体系推荐初始转染条件

-20°C 保存，有效期一年，使用前请轻轻混匀。