全血基因组DNA快速提取试剂盒

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产品描述：

产品名称：全血基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1、简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
2、超纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。
自备试剂：无水乙醇、异丙醇
产品信息：

使用方法: 提示：第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀， 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 操作：1、处理血液材料（本产品适用于处理已添加抗凝剂的 100μl-1ml 血液样品）; a、当血液样品体积小于 200μl 时,可加缓冲液 BB 补足至 200μl，再进行下一步实 验（如血液样品体积为 200μl，可直接进行下一步实验，不需加入 BB） b、当血液样品体积超过 200μl 时,需用裂解液 RBC 处理,具体步骤如下： 在样品中加入 1-3 倍体积的裂解液 RBC，颠倒混匀，室温放置 10min，1,2000rpm 离心 20sec，吸去上清，留下细胞核沉淀（如果裂解不彻底，可以重复以上步 骤一次），向离心收集到的细胞核沉淀中加 200μl 缓冲液 BB，振荡至彻底混匀。 c、如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类活更低级生物的抗凝血液，其红细胞为 有核细胞，因此处理量 5-20μl，可加缓冲液 BB 补足 200μl 后进行下面裂解步 骤。 注意：如果需要去除 RNA，可加入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液，振荡 15sec， 室温放置 5min。 2、加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入 200μl 结合液 CB,立刻 涡旋振荡充分混匀,在 70℃放置 10min,直到溶液变清亮。3、冷却后加入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。4、将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入 收集管中）12,000 rpm 离心 30-60sec，倒掉收集管中的废液。5、加入 500μl 抑制物去除液 IR, 12,000 rpm 离心 30sec，弃废液。6、加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!）, 12,000 rpm 离心 30sec, 弃掉废液。7、重复操作步骤 6。8、将吸附柱 AC 放回空收集管中, 12,000 rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温放置 数数分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑 制下游反应。9、取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 60-100μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放 置 2min，12,000 rpm 离心 2min。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得 到的溶液再加入吸附柱 AC 中，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min。（注意：若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存 在-20℃，以防 DNA 降解）

储存/保存方法: 室温保存，有效期12个月。RNaseA建议-20℃长期保存。

注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水 浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2、避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应 及时盖紧盖子。
3、不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异 也可能非常大。
4、开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。
5、为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者 4℃存放少于 3 天的标本，不要使 用反复冻融超过 3 次的标本，否则会严重降低产量。
6、洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用 水洗脱，但应该确保批 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用 时可以适当稀释。

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