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- 博尔森/BIOESN
- BES232841P
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus(CCHFV )
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR试剂盒
【产品名称】Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus(CCHFV )
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
克里米亚-刚果出血热（Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF），是一类在亚洲、中东、欧洲南部、非洲等地区的丘陵及平原地区广泛流行的蜱传疾病，曾经在全球的 30 余个国家多次爆发并引起致死案例。该病在我国又称新疆出血热（XHF），主要分布于我国西北地区，是我国重要的虫媒疾病之一。该病的致病病原体为克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV），分类学上属于负链 RNA 病毒布尼亚病毒科（Bunyaviridae）内罗病毒属（Nairovirus）。其主要的传播媒介与贮藏宿主为蜱，在经携带该病毒的蜱虫叮咬之后，可出现高热、出血、肾损伤、心血管衰竭等症状，平均致死率约为 30%。克里米亚-刚果出血热病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品是根据 PCR 原理开发的克里米亚-刚果出血热病毒检测的试剂盒。它具有下列特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据克里米亚-刚果出血热病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床
【检验原理】
本试剂盒采用 PCR技术，针对克里米亚-刚果出血热病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，用 PCR 技术对克里米亚-刚果出血热病毒的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含克里米亚-刚果出血热病毒核酸模板的情况下，PCR 反应进行特异性扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术对 PCR 扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有克里米亚-刚果出血热病毒源性成分，实现检测结果的定性分析。
【试剂组成】
| 名称 | 规格 |
| 克里米亚-刚果出血热病毒扩增液 | 50μL×1管 |
| 克里米亚-刚果出血热病毒反应液 | 950μL×1管 |
| 克里米亚-刚果出血热病毒阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 克里米亚-刚果出血热病毒阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
说明：1）不同批号的试剂盒组分不可交互使用。2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过10次。有效期12个月。
【自备物品及仪器】
无 DNA/RNA 酶的 1.5mL 离心管，0.2mL PCR 反应管，滤芯吸头(规格:10μL,200μL,1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器，琼脂糖，电泳槽，电泳仪，凝胶成像系统。
【标本采集】
1. 根据实际情况可采取食品、粪便、呕吐物、口腔样本，唾液、咽喉部鼻孔眼部和肛门拭子及病毒培养物作为检测样本。
2. 应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
取悬浮的口腔样本或粪便样本 100ul，加入 1.5ml 离心管中，用 DNA 核酸提取试剂盒进行提取即可。
1.2 DNA 提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的试剂盒：Hypure 病毒基因组 DNA 提取试剂盒(离心柱法)
2. 试剂配制（试剂准备区）
2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和浪费。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 克里米亚-刚果出血热病毒反应液 | 克里米亚-刚果出血热病毒扩增液 |
| 用量（样本数为N） | 19μL | 1μL |
2.3 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂，充分振荡混匀后 2000 rpm 离心 10 s，按照 20 μL/管分装量将试剂分装至八联 PCR 反应管中。
2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖, 并注意做好相应标识（请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间）。将 PCR 反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
备注：模板浓度高或存在 PCR 抑制物，需用超纯水稀释模板 DNA，DNA 浓度低于 50ng/ul，可加 5μL 模板，高浓度 DNA 可能抑制 PCR 反应。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于 PCR 仪反应槽内, 并记录放置顺序；
4.2 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 3min |
| 2 | 35 cycle | 95℃ | 10sec |
| 58℃ | 15sec | ||
| 72℃ | 20sec | ||
| 3 | 1 cycle | 72℃ | 5min |
| 4 | 1 cycle | 4℃ | Hold |
5. 结果分析判定
5.1 电泳检测
取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的扩增液在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。
5.2 电泳结果判断
PCR 产物阳性对照必须有目的片段大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除PCR 抑制剂的感染。
6. 检测方法的局限性
Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 注意事项
Ø 所有操作严格按照说明书进行；
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【厂家信息】：
Ø 公司名称：上海博尔森生物科技有限公司
Ø 网址：www.bioesn.net
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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