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高效动物组织/细胞总RNA提取试剂盒（双柱型）FlaPu

re Animal Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit（RE715）
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  • ￥1062
  • Genesand/金沙
  • RE715
  • 北京
  • 2025年07月15日
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    北京金沙生物科技有限公司
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      充足

    • 英文名：

      FlaPure Animal Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit

    • 保质期：

      12个月

    • 供应商：

      北京金沙生物科技有限公司

    • 保存条件：

      常温

    • 规格：

      50 次


    FlaPure Animal Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit
    高效动物组织/细胞总RNA提取试剂盒（双柱型）

    目录号
    RE715

    产品组成
    组分 规格（50次）
    裂解液 FRL（Buffer FRL） 30 mL
    去蛋白液FRW（Buffer FRW） 40 mL
    漂洗液FRW1（Buffer FRW1） 12 mL
    蛋白酶K（Proteinase K） 500 μL
    无RNA酶双蒸水（RNase-Free ddH2O） 15 mL
    RNase-Free FlaPure RNA Columns（含2.0 mL收集管） 50套
    RNase-Free FlaPure gDNA Remove Columns（含2.0 mL收集管） 50套

    保存条件
    常温（10~25℃）保存12个月，蛋白酶K -20℃保存。

    产品简介 
    本试剂盒可从≤20 mg动物软组织(肝脏、脾脏、肾脏，脑等) 、≤1×107个培养细胞中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用DTT及β-巯基乙醇，整个提取过程可在30 min内完成。试剂盒结合DNA过滤技术，可高效地过滤去除基因组DNA，提取的总RNA纯度高，无蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Northern Blot、Poly A纯化、RNase保护分析和体外翻译等实验。

    产品特点
    • 操作简便：30 min内完成数个样品的总RNA提取；
    • 高效去除基因组DNA：独特的基因组DNA过滤柱，无需DNase处理；
    • 安全低毒：无需DTT及β-巯基乙醇等有毒试剂；
    • RNA纯度高：提取的RNA无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。

    适用范围
    本品适用于动物软组织、细胞等样品的总RNA提取。

    注意事项
    1. 第一次使用前应在漂洗液Buffer FRW1中加入48 mL的无水乙醇；
    2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等，可能导致RNA降解；
    3. RNA在裂解液 FRL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗、灭菌；
    4. 配制溶液如70%乙醇应使用RNase-Free ddH2O（将水加入干净的玻璃瓶中，加DEPC至终浓度为0.1%(V/V)，混匀放置过夜后高压灭菌）。

    使用方法
    一、从动物组织中提取总RNA
    1. 每10~20 mg组织加350 µL Buffer FRL，用电动匀浆器将组织彻底匀浆, 然后加入10 µL Proteinase K，混匀后室温放置5 min；
    注意：脾脏组织建议使用5 mg，肌肉类的组织可以增加到50~100 mg。
    1. 12,000 rpm (~13,400×g) 离心2~5 min，取上清，按第3步进行操作；
    • 从培养细胞中提取总RNA
    本产品单次可处理102~107个细胞。初次使用时，建议使用2~5×106个细胞。根据结果再调整细胞量。但不论何种情况，细胞量不要超过1×107。
    1. 加入适量的Buffer FRL至细胞样品中，打散细胞；
    1. 悬浮细胞：离心收集的细胞，弹打或涡旋松散细胞沉淀，加入适量Buffer FRL (用量详见下表)和10 µL Proteinase K，涡旋或用移液枪吸打打散细胞。
    细胞量 裂解液 FRL
    ＜5×106个细胞 350 µL
    ≥5×106个细胞 600 µL
    1. 贴壁细胞：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过10 cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。
    1. 直接裂解法：彻底吸弃培养液，向培养瓶或培养皿中加入适量的Buffer FRL (用量详见下表)和10 µL Proteinase K。
    培养皿直径 裂解液 FRL
    ＜6 cm 350 µL
    6~10 cm 600 µL
    1. 胰蛋白酶处理法：彻底吸弃培养液，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，加入含有0.10%~0.25% 胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入适量的Buffer FRL (用量详见下表)和10 µL Proteinase K。
    细胞量 裂解液 FRL
    ＜5×106个细胞 350 µL
    ≥5×106个细胞 600 µL
    1. 12,000 rpm (~13,400×g) 离心2~5 min，取上清，按第3步进行操作；
    注意：样品量过多，裂解不充分会导致裂解液粘稠，堵塞gDNA过滤柱，如果裂解液非常粘稠可适当增加裂解液用量。
    1. 把RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column放在2 mL收集管中，把细胞裂解液或组织上清液转移至gDNA过滤柱中，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，保留滤液；
    注意：组织裂解液需高速离心去除杂质，细胞碎片会引起柱子的堵塞。处理某些样品时，离心后裂解液表面还可能会有一层脂类层，转移上清液尽量不要吸到这些物质。若gDNA过滤柱堵塞，可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的gDNA过滤柱中。
    1. 丢弃gDNA过滤柱，滤液中加入等倍体积70%乙醇，用移液枪吸打3~5次；
    2. 把RNase-Free FlaPure RNA Column放在2 mL收集管中，将溶液和沉淀一起转移至吸附柱中。12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
    3. 如不进行DNase I消化，加入700 µL Buffer FRW至吸附柱上，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
    4. （可选）若后续实验对RNA纯度比较严格，可选择使用DNase I（需另外订购）进行膜上DNase消化；
    1. 向RNase-Free吸附柱中加入350 μL Buffer FRW，12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液，将吸附柱放回收集管中；
    2. 向吸附柱中央加入DNase I 工作液，室温放置15 min；
    3. 向RNase-Free吸附柱中加入350 μL Buffer FRW，12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液，将吸附柱放回收集管中；
    1. 加入500 µL Buffer FRW1（使用前请先检查是否加入乙醇）至吸附柱中，室温静置2 min，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 s，倒掉废液，把吸附柱放回收集管中；
    2. 重复步骤8；
    3. 12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；
    注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
    1. 将吸附柱转移至新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30~100 μL RNase-Free ddH2O，室温静置2 min，12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，得到RNA溶液，将洗脱的RNA溶液置于-80℃保存。
    注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μL，体积过小影响回收效率。

    常见问题与解决办法
    Q1：柱子出现堵塞？
    A1：
    1. 样品过量。裂解液粘稠，减少样品量或加大裂解液用量，样品量过多反而会降低产量和纯度；
    2. 裂解液离心不充分。组织裂解液需高速离心去除杂质，杂质会引起柱子的堵塞，转移上清液尽量不要吸到杂质；
    3. 离心温度过低。本产品使用操作均在室温下进行。

    Q2：RNA提取过程中gDNA过滤柱堵塞？
    A2：
    1. 增加离心次数、时间或转数；
    2. 可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的gDNA过滤柱中。

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