- ￥4490
- 博尔森/BIOESN
- BES231488P
- 中国
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Avian Hepatitis E Virus(aHEV) Probe RT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
规格：50T/盒
【产品简介】：
禽戊型肝炎病毒(Avian Hepatitis E Virus，aHEV)是肉种鸡和蛋鸡的一种疾病，该病感染可能表现亚临床症状，伴有较低的死亡率和产蛋率下降，会引起肝脾肿大综合征和大肝大脾病等，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的禽戊型肝炎病毒探针法荧光定量 RT-PCR 试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式，不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 特异性高，引物是根据禽戊型肝炎病毒高度保守区设计，具有良好的特异性。
4. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
5. 本产品只能用于科研。
【检验原理】：
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对禽戊型肝炎病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽戊型肝炎病毒的核酸进行体外扩增检测。
【包装规格及成分】：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 禽戊型肝炎病毒扩增液 | 50μL×1管 |
| 试剂二 | 禽戊型肝炎病毒反应液 | 950uL×1管 |
| 试剂三 | 禽戊型肝炎病毒阳性质控品(5.59E+04) | 50μL×1管 |
| 试剂四 | 禽戊型肝炎病毒阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 产品说明书 | 1份 | |
注：
|
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1.试剂盒应置于-15℃以下冷冻避光储存；有效期12个月，采用泡沫盒加生物冰袋密封运输，温度不超过8℃，生产日期及有效期详见外包装盒。
2.试剂盒避免反复冻融，冻融次数不超过5次，开封后-15℃以下冷冻避光储存，不影响有效期内使用。
【适用仪器】：
ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】：
1.根据实际情况可采取病毒/组织/血液等样品1g作为检测样本
2.应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【样本保存及运输】：
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】：
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1)组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；
2)全血样本：待血凝固后，取血清100μL于1.5mL灭菌离心管中。
1.2核酸（RNA）提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化病毒DNA/RNA提取试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
2.试剂配制（试剂准备区）
2.1从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和浪费。
2.2根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 禽戊型肝炎病毒反应液 | 禽戊型肝炎病毒扩增液 |
| 用量（样本数为N） | 19μL | 1μL |
2.4盖紧八联PCR反应管盖,并注意做好相应标识（请标记在八联PCR反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联PCR反应管盖中间，以免影响信号采集）。将PCR反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3.加样（样本处理区）
将步骤1.2提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
4.PCR扩增（核酸扩增区）
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内,并记录放置顺序；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
4.3荧光通道选择：检测通道选择FAM，淬灭通道选择NONE，参比荧光选NONE。
【推荐循环参数设置】：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 50℃ | 15min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
| 40 cycles | 95℃ | 15sec | 否 | |
| 55℃ | 30sec | 是 |
5.1结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2结果判断
l阳性：检测通道Ct值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
l可疑：检测通道Ct值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现Ct值≤38.0和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
l阴性：检测结果Ct值无Ct值，无明显的扩增曲线。
6.【质控标准】
l阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；
l阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；
l以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7.【产品性能指标】
l阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。
l最低检测限：1.0×103copies/mL。
l精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于3%。
【厂家信息】：
Ø 公司名称：上海博尔森生物科技有限公司
Ø 网址：www.bioesn.net
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验要的所有组分。可以用来从低至0.1pg的总RNA中检测看家基因（housekeeping genes）（见图2），以及通过RT-PCR从长达12kb的靶标中合成高产量的cDNA。 在室温度下运输、贮存和组合反应混合物,使得这个RTS试剂盒成为进行多种RT-PCR应用的理想选择。 图2-SuperScript™III RTS First-Strand Synthesis System以方便的形式提供高灵敏度 使用
码RNA？mRNA还有不翻译的RNA呢。应该说转录水平指的是RNA水平，而蛋白应该叫翻译水平？我们这里就特指编码蛋白的mRNA的量的检测吧！方法：很多很多，我们常用的也就是RT-PCR和northern（实际上我也只知道他们，丢人啊），但是RNA没保护分析在国外很常用，也有半定量的功能，一次性试剂盒还能以此将一个表达簇一起分析，例如NFkB的转录激活谱中的8个常见基因。至于dot blot和原位杂交之流则实属于吃力不讨好，不知所云，骗人玩玩的啦，dot blot的最大贡献是发展到了反向dot blot
含有适当的DNA聚合酶的两步法RT-PCR系统或具有高保真Platinum Taq酶的一步法RT-PCR系统 高保真度 含有Pfx Taq酶的两步法RT-PCR系统 长的反转录结果 通常使用两步法RT-PCR系统可达到最佳结果含Elongase酶的一步法RT-PCR系统 回到页首 二、Generacer 1. 如何针对Generacer试剂盒设计基因特异性引物（GSP）？ 使用5’或3’RACE试剂都需要至少一条基因特异性引物，您在设计引物时需要注意以下几点要求：*50-70％
