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- 供应商:
赛默飞世尔科技
- 抗体英文名:
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP
- 抗体名:
羊抗鼠HRP二抗(100µl)
简介:WB/IHC常用必备试剂,优势:灵敏度更高,背景值低;稀释比高达 200000,性价比更高;100µl 小包装,更经济便捷。
| 应用 | 建议稀释比 |
| 免疫印迹 (WB) | 1:10,000-1:200,000 |
| 免疫组化(石蜡) (IHC (P)) | Assay-dependent |
| 酶联免疫吸附实验 (ELISA) | 1:5,000-1:10,000 |
| 种属反应 | Mouse |
| 宿主/亚型 | Goat / IgG |
| 分类 | Polyclonal |
| 类型 | Secondary Antibody |
| 偶联物 | HRP |
| 形式 | 液体 |
| 浓度 | 0.8 mg/ml |
| 保存液 | 0.01 M sodium phosphate, 0.25 M NaCl, ph 7.6, 15 mg/ml bovine serum albumin |
| 保存条件 | 4℃ |
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文献和实验素与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号,但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法,利用聚合物与二抗结合,形成聚合物-二抗复合物,实现信号放大,该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中,针对 HRP(辣根过氧化物酶)显色系统,其常用底物为DAB/AEC(HRP/DAB 呈棕褐色染色,具有很好的光稳定性,HRP/AEC 呈红色染色,在阳光下会褪色,不易保存。 基础 IHC
我做的是大鼠肾脏 MMP-9 和 PAI-1 的免疫组化染色。MMP-9 为山羊抗鼠的,PAI-1 为兔抗鼠的,均为中山公司产品。选用中山公司相应的二抗试剂盒。反复做了好几批片子可结果总是不尽如人意,背景颜色比较深,难以判断阳性结果。 具体步骤如下: 1、石蜡包埋组织切片 4μm,用的是中山公司的多聚赖氨酸防脱片的玻片,捞片后置 60℃ 烤箱烤片 2-4 小时。 2、半月后,脱蜡水化 3、PBS 液冲洗,3 分钟×3; 4、切片置于 1%triton-x-100
,通过预染蛋白marker来确定电泳停止时间。 (4) 湿转法,转膜条件:300mA恒流;0.45um孔径PVDF膜,转膜时间1h。转膜完成后丽春红染色试剂对膜进行染色,观察转膜效果。 (5) 封闭:将膜完全浸没于5%BSA-TBST中,水平摇床孵育2h(RT)。 (6) 一抗孵育:5%BSA-TBST稀释一抗, 4℃水平摇床孵育过夜。 (7) 次日,洗膜:TBST洗3次,每次10min。 (8) 二抗孵育:5%BSA-TBST稀释二抗:山羊抗兔,山羊抗鼠IgG(H+L)HRP
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