Polyplus 101000046 jetPRIME® 通

Reagent	Volume of reagent per well	Amount of DNA per well	Number of transfections per 1.5 mL vial
jetPRIME®	2 – 4 μL	1 – 2 μg	375 – 750
Lipofectamine® 2000	5 – 12.5 μL	2.5 μg	120 – 300
Lipofectamine® 3000	3.75 – 7.5 μL	2.5 μg	200 – 400

表1 推荐使用条件。根据制造商的建议，用于转染的6孔板中每个孔的DNA和试剂（jetPRIME®和竞争对手）的量。

除了降低成本外，使用更少的DNA还可以最大限度地减少转染引发的不良细胞毒性作用。因此，jetPRIME®是高转染效率和优异细胞活力的上选试剂

 

3.更好的细胞活力

jetPRIME®在转染过程中对细胞极为温和，可提高细胞活力并改善转染结果。用jetPRIME®转染的细胞是健康的，而用竞争对手观察到主要的细胞毒性（图3）。

图3 转染后24小时细胞活力。根据制造商对每种试剂的建议进行转染后24小时HeLa细胞的相位对比显微镜检查。

 

4.易于使用的protocol

jetPRIME®是一种易于使用的转染试剂（图4）：快速方便地放大和缩小；与血清和抗生素兼容。

图4 jetPRIME® protocol。DNA、siRNA以及DNA和siRNA共转染的方便方案。

 

四、产品规格

 

产品信息	提供有	jetPRIME®缓冲液
应用	应用	质粒转染/基因组编辑/siRNA 转染/不同核酸的联合递送
	细胞类型	贴壁细胞
生物学信息	传递分子类型	DNA和siRNA共培养
	缓冲液体积	2x60mL
	转染次数	1.5mL jetPRIME®转染试剂足以在24孔板中进行1500次转染，或在6孔板中进行375次转染；1.5mL jetOPTI®转染试剂足以在24孔板中进行1500次转染，或在6孔板中进行375次转染。
通用参数	试剂与试剂盒类型	jetPRIME®
	试剂含量	jetPRIME® 1.5 mL

 

五、产品应用​​

1.质粒转染

jetPRIME®可导致不同来源的转染粘附细胞系以及原代细胞的百分比显著较高（表1）。

表1 使用jetPRIME®的各种细胞类型的转染效率。转染后24小时通过FACS分析测定GFP阳性细胞的百分比。

 

质粒是常见于细菌中的环状DNA小分子。质粒与染色体DNA分开存在和复制，在细菌中，质粒通常携带有利于细菌生存的基因。质粒可以被有意地引入所需的细胞中，并用于在特定细胞系中过表达感兴趣的基因。这种过程被称为DNA转染，是研究感兴趣的基因功能或蛋白质的常用方法。

 

2.基因组编辑

CRISPR/Cas9系统在哺乳动物细胞中的使用最近已经成为在特定基因座修饰细胞基因组的一种非常方便的方法。它涉及将（a）编码Cas9的一个或多个质粒、特异性gRNA和最终要插入的序列，或（b）一个或两个质粒和RNA分子（gRNA）的混合物瞬时转染到哺乳动物细胞中。

 

3.siRNA转染

jetPRIME®可使多种细胞系的内源性基因表达降低90%以上。例如，jetPRIME®介导的用靶向HeLa细胞中内源性层粘连蛋白A/C的10nM siRNA双链体转染HeLa细胞，将层粘连蛋白/C基因表达显著降低到几乎无法检测的水平（图1）。

图1使用jetPRIME®的内源性层粘连蛋白A/C沉默。用10nM的21-mer层粘连蛋白A/C siRNA转染HeLa细胞。48小时后，使用抗层粘连蛋白A/C的抗体通过免疫荧光显微镜评估层粘连蛋白/C沉默。

 

4.不同核酸的共转染

jetPRIME®非常适合DNA和siRNA/miRNA共转染实验或几种DNA质粒的共递送。

Polyplus用jetPRIME®进行了DNA和siRNA递送，并在各种毒性极低的细胞系中观察到高效的基因沉默。使用10nM的siRNA，在贴壁细胞中实现了超过90%的沉默（图2）。

图2 使用jetPRIME®进行DNA和siRNA共转染后，几种细胞系中的外源性萤光素酶沉默。在6孔板中用每孔400ng p4CMV Luc和10nM荧光素酶siRNA进行实验。

 

六、实验流程（简要版）​​

1.制备转染复合物：

♦在无菌管中混合DNA/siRNA + jetPRIME®（比例参考说明书）。

♦涡旋10秒，室温静置10分钟。

 

2.转染细胞：

♦将复合物滴加至细胞培养基中，轻柔混匀。

♦37°C培养24-72小时后检测表达或沉默效果。

 

七、注意事项​

1.关键优化点：

♦首次使用时，建议测试不同DNA:试剂比例（如0.5:1至1:3）。

♦转染时避免使用抗生素（如Pen/Strep），以防细胞毒性。

 

2.适用细胞验证：

♦对极难转染细胞（如原代T细胞），可尝试jetPRIME® Endo-Free版本（货号：101000010）。

 

3.细胞状态

♦建议细胞密度达50-70%时转染。

 

4.优化建议

♦首次使用可测试不同比例（参考说明书）。

 

八、储存条件

5°C±3°C保存，避免冷冻或高温（保质期见包装标签）。