- ￥100 - 500
- EZBioscience
- EZB-exo102
- 国外
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 技术资料
- 英文名：
Exosome Isolation Kit (from plasma, for protein detection) (EZB-exo102)
- 供应商：
北京百奥创新科技有限公司
- 规格：
具体价格请联系我们
EZBioscience® Exosome Isolation Kit（来自血浆，用于蛋白质检测）提供了一种简单、可靠、快速的方法，可从人和动物血浆中分离高质量的总外泌体，无需超速离心。 外泌体是含有 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），由培养中的各种细胞分泌，在血液、唾液、尿液和母乳等体液中大量存在。据报道，外泌体作为细胞间信使发挥作用，在特定细胞之间传递效应物或信号大分子；然而，它们的形成、货物的组成以及它们所涉及的生物途径仍不清楚。 外泌体功能和运输的生物学和医学研究需要分离完整的外泌体，但目前使用的方法繁琐且困难。 EZBioscience® 外泌体分离试剂盒（来自血浆，用于蛋白质检测）提供了一种简单可靠的方法 从人和动物血浆样本中浓缩完整的外泌体。 通过水分子，外泌体分离试剂将溶解性较差的成分（即外泌体）从溶液中挤出，从而可以通过短暂且相对低速的离心来收集它们。 使用该试剂盒可在 4 小时内从血浆中分离出外泌体。 分离后的外泌体可用于进一步的实验，如免疫印迹和 RNA 纯化、RNA 测序和 RT-qPCR 等。
产品组分
a) 不建议使用外泌体沉淀试剂 (EPR) 从任何其他体液或细胞培养基中分离外泌体。专门的外泌体分离试剂可用于血清、尿液、细胞培养基和其他体液，每种试剂都针对其特定类型的生物样品进行了优化。
b) 对于血液样本，如果计划进行下游 RNA 表达谱分析，请勿使用溶血样本。即使是血清或血浆中的微量红细胞也会影响 RNA 谱。相反，我们建议使用血清或柠檬酸盐/EDTA 血浆，不鼓励使用肝素血浆（从肝素血浆中分离的 RNA 会降低 PCR 性能）。
准备样品
1. 从储存中取出血浆样品并置于冰上。如果样品被冷冻，则将样品置于 25°C 至 37°C 的水浴中直至完全解冻，然后置于冰上直至需要。
2. 将血浆样品在 20°C 下以 3000 × g 离心 10 分钟以去除细胞和碎片。
3. 转移 将含有部分澄清血浆的上清液转移到新试管中，而不会干扰沉淀。
4. 将新管在 20°C 下以 10000 × g 离心 20 分钟以去除碎屑。
5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新试管中，不要干扰沉淀，将其置于冰上直至准备好进行分离。
分离外泌体
注意：如果您的兴趣与外泌体中的蛋白质有关，建议使用蛋白酶 K 处理以去除血浆中的大部分蛋白质，但这可能会导致暴露在外泌体表面的蛋白质部分降解。 如果您只对外泌体中的 RNA 感兴趣，则不需要蛋白酶 K 处理。
1. 将所需体积的澄清血浆转移到新试管中，加入 0.5 体积的 1× PBS。 通过涡旋彻底混合样品。 可选：如果分离的外泌体用于蛋白质水平分析（例如蛋白质印迹），则使用蛋白酶 K 处理样品。 对于 RNA 分析，此步骤是 不必要。 向样品中加入 1/50 体积的蛋白酶 K。 例如，对于 100 μl 起始体积的血浆（用 PBS 稀释后为 150 μl），加入 2 μl 蛋白酶 K。涡旋样品，然后将试管在 37 °C 下孵育 10 分钟。
2. 将 0.2 体积（即总体积 = 血浆 + PBS）外泌体沉淀试剂（来自血浆）添加到样品中。
| Plasma + PBS |
Reagent |
| 200 µl + 100 µl |
60 µl |
| 1 ml + 0.5 ml |
300 µl |
3. 通过涡旋或倒置充分混合血浆/试剂混合物，直至溶液均匀。将样品在 2 ~ 8°C 下孵育 2 小时。
注意：如果需要，此沉淀步骤可以延长至过夜。
4. 孵育后，将样品在 20°C 下以 10000 × g 离心 30 分钟。 注意：对于小鼠血浆，在 4 °C 下离心 30 分钟。
5. 通过移液器小心吸出上清液并丢弃。 注意：外泌体包含在试管底部的颗粒中。
6. （可选）以 10000 × g 离心管 30 秒以收集任何残留试剂。用吸管小心吸出任何残留的上清液。
重悬外泌体
1. 向沉淀中加入 1× PBS 或类似缓冲液，上下涡旋或移液器重悬外泌体。
| Starting Plasma Volume |
Resuspension Volume |
| 200 µl |
20 µl |
| 1 ml |
100 µl |
注意：纯化后的外泌体样本可在 2 ~ 8°C 下保存长达 2 天，也可在 -20°C 以下长期保存。为了最大限度地降低 RNase 污染的风险，我们建议直接进行进一步的下游样品处理。
Introduction
The EZBioscience® Exosome Isolation Kit (from plasma, for protein detection) provides a simple, reliable, and rapid method for isolating high-quality total exosome from human and animal plasma, without the need for ultracentrifugation.
Exosomes are small vesicles (30–120 nm) containing RNA and protein that are secreted by various types of cells in culture, and found in abundance in body fluids, such as blood, saliva, urine, and breast milk. Exosomes were reported to function as intercellular messengers, delivering their cargo of effector or signaling macromolecules between specific cells; however, their formation, the makeup of the cargo, and biological pathways in which they are involved remain unclear.
The biological & medical study of exosome function and trafficking requires the isolation of intact exosomes, but the current methods used are tedious and difficult. The EZBioscience® Exosome Isolation Kit (from plasma, for protein detection) provides a simple and reliable method of concentrating intact exosomes from human and animal plasma samples. By tying up water molecules, the Exosome Isolation reagent forces less-soluble components (i.e. exosomes) out of solution, allowing them to be collected with a brief and relatively low-speed centrifugation.
The exosome could be isolated from the plasma within 4 hours by using this Kit.
After Isolation, the exosome can be used for further experiments, auch as Immuno-blotting and RNA purification, RNA sequencing, and RT-qPCR etc. .
Protocol
General Guidelines
a) The Exosome Precipitation Reagent (EPR) is not recommended for isolation of exosomes from any other body fluids or cell culture media. Specialized Exosome Isolation reagents are available for serum, urine, cell culture media, and other body fluids, each optimized for its specific type of biological sample.
b) For sample from blood, if downstream RNA expression profiling is planned, do not use hemolyzed samples. Even traces of red blood cells in serum or plasma will affect the RNA profile. Instead, we recommend using serum or citrate/EDTA plasma and discourage using heparin plasma (RNA isolated from heparin plasma can reduce PCR performance).
Prepare Sample
1. Remove the plasma sample from storage and place on ice. If the sample is frozen, the sample in a 25°C to 37°C water bath until it is completely thawed, and place on ice until needed.
2. Centrifuge the plasma sample at 3000 × g for 10 minutes at 20°C to remove cells and debris.
3. Transfer the supernatant containing the partially clarified plasma to a new tube without disturbing the pellet.
4. Centrifuge the new tube at 10000 × g for 20 minutes at 20°C to remove debris.
5. Transfer the supernatant containing the clarified plasma to a new tube without disturbing the pellet, and place it on ice until ready to perform the isolation.
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