- ￥1725
- 江蓝纯生物
- 国内
- JLC-G7897
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
CPT1测试盒
- 库存：
637
- 供应商：
江西江蓝纯生物有限公司
- 规格：
50管/48样
测定方法：分光光度法
测定规格：50管/48样
保存条件：低温避光保存
测定意义：
肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基辅酶A将酰基转移至L-肉毒碱的反应，在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。
测定原理：
基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A(COA-SH)，与Ellman试剂DN-TB反应后，产生的TNB。通过其吸收峰值得变化（412nm），来定量分析CPT-1的活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆液于600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CPT-1（此步可选做）。
⑤在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CPT-1测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入2mL无水乙醇，混匀，再加入44mL试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）在试剂六中加入2mL蒸馏水，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试
剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（3）在1mL玻璃比色皿中加入40μL样本、880μL试剂五和40μL试剂六，混匀，记录412nm处20秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注 意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
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