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亚铁氧化酶(HP)科研专用测试
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6个月
HP测试盒
782
上海机纯实业有限公司
50管/24样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶,HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介导铁的跨膜转运中有重要作用。测定原理:HP催化Fe2+氧化为Fe3+,Fe2+和ferrozine反应显色,在560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。自备用品:可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:试剂一:液体50 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体30 mL×1瓶,4℃避光保存。粗酶液提取:按照组织质量(g):水mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。HP活性计算:标准曲线:y = 16.427x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x为标准品浓度,μmol/mL;y为吸光值ΔA)(1)按样本质量计算单位定义:每g样本每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。HP(nmol/min/g 鲜重)=(△A+0.0006)÷ 16.427×V总÷T ÷(W× V样÷V样总)× 1000= 20.29×(△A+0.0006)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算单位定义:每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷ 16.427×V总÷T ÷(Cpr×V样)× 1000= 20.29×(△A+0.0006)÷CprV总:反应体系体积,0.1 mL;V样:加入样本体积0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;1000,μmol到nmol的转换系数。
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