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- 国内
- JCsw_1596
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
MDHm测试盒
- 库存：
586
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
50管/48样
注 意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
测定原理：
MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体50mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1mL×1支，-20℃保存；
试剂四、液体50 mL×1瓶，在4℃保存；
试剂五、粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入300μL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂六、粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入300μL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本测定的准备：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆液于600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的MDH（此步可选做）。
⑤在步骤④中的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体MDH测定。
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文献和实验制备的基因芯片产品在1.28*1.28cm2表面上可包含300,000个20至25mer寡核苷酸探针，每个探针单元的大小为10um X 10um。其实验室芯片的阵列数已超过到1,000,000个探针。 图11-5-3 基因芯片在片合成原理图 基因芯片点样法首先按常规方法制备cDNA（或寡核苷酸）探针库，然后通过特殊的针头和微喷头, 分别把不同的探针溶液，逐点分配在玻璃、尼龙或者其它固相基底表面上不同位点,并通过物理和化学的结合使探针被固定于芯片的相应位点。这种方式较灵活，探针片段可来自多个途径
水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。 （四）包装:对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。 二、消毒和灭菌 微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因 （一）物理消毒法 1、紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强
机软件处理分析，得到有关基因图谱。目前，如质谱法、化学发光法、光导纤维法等更灵敏、快速，有取代荧光法的趋势。 3、应用 3．1 测序 基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列，这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。Mark chee等用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列，准确率达99%。Hacia等用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异，结果发现在外显子11约3.4kb长度范围
