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葡萄糖6磷酸酶(G6P)科研专
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G6P测试盒
791
上海机纯实业有限公司
50管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。测定原理:G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:提取液:60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体47.5 mL×1瓶, 4℃保存;试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;试剂四:试剂×1支,-20℃保存;样本的前处理: 1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。3、血清(浆)样品:直接检测。测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。2、工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。3、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。4、 在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.3,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
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