线粒体柠檬酸检测试剂盒 | MCA含量测试盒_微量法

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
MCA是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要
指标之一。
 

测定原理：
MCA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出MCA的含量。

自备仪器和用品：
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、蒸馏水。

试剂组成和配制：
酸性提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入6mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
标准液：液体1mL×1支，10μmol/mL柠檬酸标准液，4℃保存。

线粒体中柠檬酸提取：
称0.05~0.1g样品（建议称0.1g样本），加入0.5mL酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃离心10min，弃上清（取300μL该上清液和300μL碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入0.5mL酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），取此溶液300μL和300μL碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。