硝酸还原酶活性检测试剂盒NADH速率法 | 硝酸还原酶活性含

注　意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
NR（ EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

测定原理：
NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；NADH 在 340 nm 有大吸收峰，通过测定 NADH 减少速率来表示 NR 活性。

需自备的仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
诱导剂储备液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
提取液：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加 2mL 提取液溶解，现配现用。
诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释 10 倍，即取 10mL 诱导剂储备液加 90mL
蒸馏水，充分混匀。

动植物组织样品的前处理：
（1）取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡 2h，取出样本，滤纸吸干。
（2）按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

注意：
1、 建议使用新鲜没有冷冻过的样本。
2、 一般不要诱导处理，预测定结果没有活性（ΔA≤0）则需要诱导处理。



细菌或培养细胞的前处理：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：
1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
2、样本测定
在96 孔板中依次加入 10μL 样本上清，75μL 试剂一，90μL 蒸馏水，后加入 25μL 试剂二。充分混匀后，记录 1min 时吸光值 A1 和 6min 时吸光值 A2，ΔA=A1-A2。