γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)科研专用测试盒/可见分光光

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

测定原理：
在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。

试剂组成和配制：
试剂一：液体70mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入蒸馏水3.5 mL充分震荡溶解。
试剂四：液体16mL×1瓶，室温保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入30mL蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入1.0 mL浓硫酸（自备），边加边搅拌。

粗酶液提取： 
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。