维生素C检测试剂盒(菲咯啉微板法)

维生素C检测试剂盒(菲咯啉微板法)
产品简介：
维生素C(VitaminC)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。Vc有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

维生素C检测试剂盒(菲咯啉微板法)检测原理是在酸性条件下，维生素C把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以酶标仪534nm处检测吸光度，在一定浓度范围(样品浓度控制在0.5~50μg/ml)吸光度与维生素C含量呈线性关系，获得VitaminC含量，主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的检测，其优点是：1、反应稳定，不易褪色；2、操作简便；3、还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，因此专一性；4、灵敏度高。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水、无水乙醇
2、研钵或匀浆器
3、离心机、离心管、试管
4、96孔板、酶标仪
5、恒温箱或水浴锅

操作步骤(仅供参考)：
1、稀释组织匀浆液：按组织匀浆液(5×)：蒸馏水=1：4的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
2、准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量2~3g，加入研磨器内，再加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，后一并倒入50ml离心管，补充1×组织匀浆液至22ml，充分混匀，4000g离心5min，上清液即为待测液。
3、配制系列VitaminC标准：取干净的96孔板，按下表进行操作，依次稀释。
4、VitaminC加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的VitaminC含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置2~3平行孔，求平均值。
5、VitaminC测定：混匀，30℃温箱中反应60min，以空白调零，酶标仪测定534nm处系列标准管、测定管的吸光度。
计算：以系列标准VitaminC(10、20、30、40、50μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。以测定孔吸光度代入回归方程求得维生素C含量。

注意事项：
1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、组织匀浆液有腐蚀性，应小心操作，避免直接接触。
3、加样后反应不完全，因此不能立即测定，一般情况下60min内即可充分反应，应当在60~120min内测定完成。
4、待测样品如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
5、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

附录：标准曲线制作：在室温条件下按说明书操作，用酶标仪540nm对系列标准(0、1、2、4、6、8、10、20、30、40、50μg)进行吸光度的测定，其标准曲线如下(仅供参考)：

注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，标准曲线会有差异，该值仅供参考，根据测定经验显示Vc标准在0.5μg以下，60μg以上，标准曲线会有偏差。