多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Ki

产品信息

 

产品名称	产品编号	规格	目录价（元）	促销价（元）
Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)	13894ES60	100 T	895	600
	13894ES80	1,000 T	7245	5000
	13894ES92	10,000 T	67135	40000

 

产品描述

 

Hifair^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，缓冲液中已含有Mg²⁺和 dNTP , 有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重扩增反应。并添加了dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品组分

 

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13894ES60(100 T)	13894ES80(1,000 T)	13894ES92(10,000 T)
13894-A	5×Hifair® V Universal MP Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13894-B	Hifair® V Universal Enzyme Mix	120 μL	1.2 mL	12 mL

【注】

a. 5×Hifair^® V Universal MP Buffer 为Hifair^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。

b. Hifair^® V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase和UDGase。

适用机型 

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

 

运输和保存方法

 

冰袋运输。-20°C储存，有效期12个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
5×Hifair® V Universal MP Buffer	6	1x
Hifair® V Universal Enzyme Mix	1.2	-
Primer/Probe Mixa	x	-
模板RNAb	1-5	-
RNase Free H2O	to 30	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪

头。避免交叉污染和气溶胶污染。

a. 引物探针混合液浓度：Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。

b. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	40-45
	60℃a	30 secb

【注】：退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

a. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

b. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

 

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220729