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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存:
464
- 样本:
来电咨询
- 标记物:
详见说明书
- 适应物种:
来电咨询
- 应用:
仅供科研研究使用
- 检测方法:
微量法
(PEPC)测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
储存条件:低温保存
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
PEPC(EC 4.1.1.31)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是催化二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,对三羧酸循环的运转起重要调节作用。
测定原理:
PEPC催化CO2生成草酰乙酸和HPO42-,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算PEPC活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体15 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;
试剂三 :原液10μL×1支,4℃保存;
试剂三:稀释液5mL×1瓶,4℃保存;
测定步骤和加样表:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)取试剂二瓶一瓶,加入6mL试剂一和4.2mL蒸馏水充分混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用。
(2)试剂三工作液的配制:将试剂三原液:试剂三稀释液=1μL:329μL稀释,混匀,用多少配多少。
(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、20μL试剂三、170μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。
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