甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_微量法

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/96样
储存条件：低温保存
 注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：                           
MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，与柠檬酸合酶（CS）共同参与三羧酸循环的调节。

测定原理：
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A，进一步水解产生甲基柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成的TNB，在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5mL×1支，-20℃保存；
试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；




1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入1mL无水乙醇和22mL试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂五和10μL试剂六，混匀，记录412nm处20秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。