大肠杆菌O157乳胶凝集试剂盒

 M44 大肠杆菌O157乳胶凝集试剂盒   一、用途   大肠杆菌O157乳胶凝集检测试剂用于从粪便样品中经选择性平板分离的可疑菌落进行快速乳胶凝集确证鉴定。可从病人腹泻样品中分离出的菌落快速区分大肠O157与其它大肠杆菌血清型。该试剂盒仅供专业人员使用。   二、原理   乳胶颗粒表面包被与大肠杆菌O157脂多糖抗原具有特异性的抗体。当敏化的乳胶颗粒遇到含有O157抗原的菌悬液时，可发生特异性、高灵敏度的免疫化学反应，使分散的乳胶微粒迅速形成肉眼可见的凝集。   三、试剂盒组成成分   REAG TEST 测试试剂 HM44a 大肠杆菌O157乳胶测试试剂 2.5mL   乳胶颗粒包被与大肠杆菌O157具有特异性的兔抗血清。含0.099%的NaN3防腐剂。(蓝色瓶盖)   REAG CONTROL 对照试剂 HM44b 对照乳胶试剂  2.5mL   乳胶颗粒包被不与大肠杆菌O157反应的兔抗体，含0.099%的NaN3防腐剂。(黑色瓶盖)   NaCl 0.85% 0.85%盐水 HM40 0.85%生理盐水 5.0mL   含0.099%的NaN3防腐剂。(白色瓶盖)   使用说明书   检测板   搅拌棒   需要的其它材料   l 接种环   l 山梨醇麦康凯琼脂(含1%D-山梨醇不含乳糖的麦康凯琼脂)   四、警告和注意事项   安全：   1、试剂仅供体外诊断使用。   2、试剂盒作防腐剂使用的NaN3可与铅或铜制品反应形成易爆的金属叠氮化物。可用大量水冲洗以避免叠氮化物的堆积。   3、在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施。被污染的物品可用3%的NaClO消毒处理30分钟。含酸的废液应作中和处理。   检测过程：   1、大肠杆菌O157乳胶凝集试剂盒应按说明书使用。   2、所有试剂在使用前应达到室温。   3、不要稀释试剂盒内的任何试剂   4、不要混合不同批次试剂盒的试剂。   5、不要冷冻试剂盒内的试剂。   6、不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性对照试剂或细菌样品。   7、使用前应确保检测板清洁干燥。   8、试验时应注意检测过程中的质量控制部分。   9、注意凝集状态，呈凝乳状或纤维状可能为非真实凝集。   五、贮存及保质期   检测试剂盒不使用时应贮存在2～8℃，并应在包装盒标签上的有效期内使用检测试剂。   六、样本   病人的样品(血粪便样品)应在山梨醇麦康凯琼脂培养基上分离培养，35～37℃有氧培养18～24小时。产毒素的大肠杆菌O157：H7菌落颜色为无色，菌落形态与其它的大肠杆菌相似。   七、检测过程   质量控制：   在每次使用检测试剂盒前应作下列质量控制检测以确证试剂的有效性   1、检测试剂的控制：分别滴1滴测试试剂(HM44a)和1滴对照试剂(HM44b)于检测板的二个反应环内。并在该两个反应环内再分别各滴加1滴生理盐水(HM40)，各用1支搅拌棒在整个区域内混匀液体，轻摇检测板30秒，观察2个反应环内是否会出现凝集。如果出现凝集反应，表明测试试剂、对照试剂或生理盐水可引起非特异性凝集，应废弃处理。   2、阳性对照的控制：按测试程序(如下所述)，在检测板的二个反应环内各滴1滴已知的大肠杆菌O157菌悬液，轻摇检测板30秒，观察2个反应环内是否会出现自动凝集。如果二个反应环内均无凝集反应，则分别滴1滴测试试剂(HM44a)和1滴对照试剂(HM44b)于2个测试反应环内，然后分别混匀检测试剂与菌悬液，轻摇检测板，观察2个反应环内凝集结果，测试试剂反应环内应出现明显凝集，对照试剂反应环内应无凝集发生。如果未出现此2种现象，说明试剂失效或污染，应废弃处理。   测试程序：   1、各滴1滴(约30μL)生理盐水(HM40)于检测板的2个反应环内。   2、用接种环从山梨醇表康凯琼脂平板上挑取无色的可疑菌落。   3、与反应环内的生理盐水混合，形成均匀的混浊的菌悬液，并将菌悬液均匀涂布于整个反应环内。   4、轻摇检测板30秒，观察是否会出现自动凝集现象。如果菌悬液保持均匀状态，继续第5步。如果菌悬液出现纤维状或颗粒状自凝现象，在加入乳胶试剂后易出现假阳性结果，因此这种样品不适合采用乳胶试剂检测。应选用其它方法检测。   5、摇匀乳胶测试试剂。   6、将1滴乳胶测试试剂和1滴对照试剂分别滴加至2个反应环内的菌悬液。不要使试剂的滴管接触到菌悬液。   7、两个反应环分别用1支干净的搅拌棒将菌悬液和乳胶试剂混合均匀。   8、轻轻摇动检测板，在2分钟内观察结果，凝集反应会产生明显的乳胶颗粒凝集现象。   9、记录结果后，将搅拌棒和检测板进行适当的消毒处理。   八、结果说明   按下表进行判断结果

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