3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒_可见分光光度法

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：50管/48样    
储存条件：低温保存
注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

测定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。

需自备的仪器和用品：
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体28μL×1支，4℃保存；




测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在试剂三中加入1mL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（3）在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。