LwaCas13a酶/cas13/CRISPR检测用酶

【储存条件及有效期】
有效期1年，保存条件-20°C；如长期储存，建议置于-80°C。
建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。
【产品特点】
采用一步法纯化制备，保留酶活性，经过测试酶活性显著高于同类产品。
【活性定义】
在总体积为20 μL的反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。
例：若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性为9 transU/pmol，则表明1 pmol的该批次 LwaCas13a酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割9 pmol ssRNA探针。
【质量保证】
样品纯度：～95% （SDS-PAGE鉴定）。
【检测步骤】
需要准备的其它试剂

1. Reporter：Cas13a 切割底物。即在剪切反应体系中加入ssRNA报告探针，该探针5′端标记荧光报告基团(FAM)，3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的Reporter 进行检测，或自行设计合成 Reporter。

产品名称	编号
ssRNA reporter（RNA探针）	EDR0001

1. crRNA/gRNA：与 Cas13a 结合，形成功能复合物，被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。

名称	规格	编号
crRNA生物合成	2OD	EDR0002
crRNA化学合成	2OD	EDR0003

 

1. RNase Inhibitor （可选）：抑制 RNase，防止RNA降解。（货号：AI101-02）
2. 恒温扩增试剂盒，RPA扩增试剂盒。

【测试反应体系】

组分	体积/ μL	终浓度
5 μM LwaCas13a	0.2	50 nM
5×Cleavage Buffer	4	1X
500 nM crRNA	1	25 nM
2 μM ssRNA Reporter	1.25	125 nM
10 U RNase Inhibitor	1	0.5 U
1 μM RNA target	1	50 nM
H2O
Total	20 μL	20 μL

【反应条件】
使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec 采集一次荧光信号。

【酶活性对比实验结果】

Fig 1. Results of Cas13 collateral cleavage at different product.
横坐标为反应时间，纵坐标为 Bio-rad CFX96荧光PCR仪检测结果。由图可见，相同的条件下，本产品在20分钟内可完全切割RNA报告探针，并达到荧光峰值，而其他同类产品荧光值明显较低，反应速度较慢，可见本品切割效率显著高于同类产品。

【注意事项】
1.为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
2.Cas13a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。