8.5mL P800采血管，DPP-IV、酯酶、由白酶抑制

碱裂解法大量提取质粒（500mL菌液）

3、加入40mL冰冷的新配制的溶液Ⅱ，盖紧瓶盖，缓缓地颠倒离心数次，使离心管内溶物充分混匀。此步需注意：混匀过程不可用力过猛，否则容易导致基因组 DNA污染。正确的方法是：缓缓地颠倒离心管数次或双手持管使其轴线水平，并使管沿轴线旋转，直到内容物粘稠有“拉丝”为止。 4、加30mL用冰预冷的溶液Ⅲ，盖紧瓶盖，摇动离心管数次以混匀内容物，冰上放置15 min，此时应形成白色絮状沉淀。 5、配平，4℃下4400rpm离心15min。注意：如果第4步混合不均匀，则不能形成致密

手把手教你做好体外 DNA 重组

】1. 消化缓冲液：100 mM NaCl，10 mM Tris.Cl (pH8.0)　25 mM EDTA (pH8.0)，0.5% (w/v) SDS，0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存；2. 将 200 mg～1 g 的组织用预冷的研钵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮，然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h

【讨论】碱裂解法大规模质粒提取，自己配的溶液提出2000ug/ml的质粒啊

，切忌延长时间，可适当缩短。 5.加入12ml冰预冷的溶液III，温和上下颠倒混匀，避免强烈震荡，冰上放置10min。此时，形成的沉淀为细菌染色体DNA，大分子量RNA，蛋白质/钾盐/细胞膜的混合物。 6.12000g，4℃离心20min 7、取上清至一个干净的50ml离心管中，为了防止蛋白沉淀，可二次离心7min，取上清至一个干净的50ml离心管中，加入0.6倍容积的异丙醇混匀，室温放置10min 8.12000g，室温离心15min。4℃离心将导致大部分盐析出混入